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Apéndice B: Almacenamiento, cuantificación y
determinación de la pureza del ADN
Almacenamiento de ADN
El ADN purificado puede almacenarse a una temperatura de 2–8 °C o –20 °C
durante un máximo de 24 meses. Para un periodo de almacenamiento
superior, los eluidos deben almacenarse a –70 °C.
Cuantificación de ADN
La concentración de ADN debe determinarse midiendo la absorción a 260 nm
(A
) en un espectrofotómetro. Las lecturas de absorción a 260 nm deben estar
260
entre 0,1 y 1,0 para ser precisas. Una absorción de 1 unidad a 260 nm
corresponde a 50 µg de ADN por mililitro (A
tampón de pH neutro (por ejemplo, 10 mM Tris·Cl,* pH 7,0) para diluir las
muestras y calibrar el espectrofotómetro.
magnéticas en el eluido puede afectar a la lectura A
a la obtención de resultados en los ensayos de biología molecular. Si el ADN
purificado es analizado por secuenciación por terminador fluorescente
mediante electroforesis capilar, el tubo que contiene el eluido deberá aplicarse
primero a un separador magnético adecuado y transferir el eluido a un tubo
limpio (véase a continuación).
Para cuantificar el ADN purificado utilizando el sistema EZ1:
Aplique el tubo que contiene el ADN a un separador magnético adecuado
(por ejemplo, el QIAGEN 12-Tube Magnet, ref. 36912) durante 1 minuto.
En caso de no disponer de un separador magnético adecuado, centrifugue
el tubo que contiene el ADN durante 1 minuto a velocidad máxima en una
microcentrífuga para aglomerar las partículas magnéticas restantes.
Una vez que la separación esté completa, retire cuidadosamente 10–50 µl
del ADN purificado y dilúyalo en un volumen final de 100 µl de tampón de
pH neutro.
Mida la absorbancia a 320 nm y 260 nm. Réstele el valor de absorbancia
obtenido a 320 nm al valor de absorbancia obtenido a 260 nm para
corregir la presencia de partículas magnéticas.
* Al trabajar con productos químicos, use siempre una bata de laboratorio, guantes
desechables y gafas protectoras. Para obtener más información, consulte las fichas de datos
de seguridad (SDS, safety data sheets) correspondientes que el proveedor del producto pone
a su disposición.
†
Si las muestras no están diluidas, utilice agua para calibrar el espectrofotómetro.
78
=1 50 µg/ml). Utilice
260
†
El remanente de partículas
260
Manual de uso del kit EZ1 DSP DNA Blood 02/2015
, pero no debería afectar
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