Tabla de contenido
Publicidad
Análisis de curvas de disociación de alta resolución
11.8
Análisis de datos PCR en tiempo real
Es útil realizar un análisis de los datos PCR en tiempo
real antes del análisis de datos HRM. Los datos PCR en
tiempo real pueden identificar los ensayos de
rendimiento deficiente. La identificación de estos
valores atípicos y la eliminación de los mismos del
posterior análisis HRM optimizará la eficacia general
del análisis HRM, ya que el análisis de un producto PCR
de baja calidad también dará lugar a resultados HRM
deficientes. Recomendamos analizar los datos PCR en
tiempo real cuantitativos de la forma siguiente:
1. Analice los datos en tiempo real mediante la
2. Evalúe el nivel final de la fluorescencia. Si el nivel
3. Utilice la opción "Comparative Quantitation" de la
11-20
opción "Quantitation" en la ventana "Analysis". Si
existen valores C
considerará que las reacciones correspondientes
han amplificado demasiado tarde. Estas muestras
deberán analizarse con reservas o incluso
eliminarse de los análisis ya que constituyen valores
atípicos. La amplificación tardía se debe
normalmente a una cantidad demasiado baja de
plantilla de iniciación y/o a niveles elevados de
degradación de las muestras.
final de la fluorescencia en cualquier gráfico de
amplificación es bajo en comparación con la
mayoría de los gráficos del set de datos, excluya
estas muestras del análisis si su valor C
30. Una fluorescencia final baja puede indicar una
cantidad de colorante incorrecta, niveles
incorrectos de componentes de reacción (como
p. ej. cebadores) o la acción de inhibidores.
ventana "Analysis" para obtener la eficacia de
reacción de cada muestra. Si la eficacia no es
similar a la de las demás reacciones en el
experimento o es inferior a 1,4, la reacción deberá
excluirse por constituir un valor atípico.
Manual del usuario Rotor-Gene Q MDx 09/2018
iguales o superiores a 30, se
T
es inferior a
T
Publicidad
Tabla de contenido
