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Procedimiento
1. Prepare el recipiente de reacción y esterilícelo en el autoclave como se describe en las
secciones 6.10 y 6.11.
2. Prepare todas las soluciones y los materiales de laboratorio.
3. Llene el recipiente de reacción esterilizado en el autoclave con 225 mL de solución de polimeriza-
ción.
4. Se centrifuga un cultivo celular con aproximadamente 6×10
sidades personales) y las perlas se vuelven a suspender en 2 mL de tampón de lavado MOPS
estéril y se mezclan con 10 mL de solución de alginato de sodio al 1,5 %. Tenga cuidado de no
introducir o de que sólo entren unas pocas burbujas de aire durante la mezcla.
5. Llene una jeringa de 20 mL con la suspensión de células-alginato y acóplela al recipiente de reac-
ción en una bolsa de aire laminar.
6. Fije el recipiente de reacción a la unidad de control del Encapsulator, que está colocado sobre el
banco.
7. Inicie la formación de perlas con los parámetros anteriormente establecidos.
8. Permita la formación de perlas durante 5 minutos; después, interrumpa el agitador y drene la solu-
ción de polimerización.
NOTA
Las perlas y después las cápsulas deben cubrirse siempre con una cantidad pequeña de líquido
para evitar la formación de grumos. Si no, la resuspensión de las perlas y las cápsulas resultaría
difícil y la membrana podría quedar dañada.
9. Bombee 75 mL de solución de PLL al 0,05 % y déjela que forme la membrana de PLL-alginato
durante 10 minutos.
10. Drene la solución de PLL al 0,05 %.
11. Bombee 150 mL de tampón de lavado MOPS, agítelo durante 1 minuto y después drénelo.
12. Bombee otros 150 mL de tampón de lavado MOPS, agítelo durante 5 minutos y después drénelo.
13. Bombee 100 mL de solución de alginato al 0,03 % y remuévalo durante 5 minutos para que se
forme la membrana exterior de alginato; después, drene la solución de alginato.
14. Bombee 150 mL de tampón de lavado MOPS, agítelo durante 1 minuto y después drene el
tampón.
15. Bombee 150 mL de solución de despolimerización y agítelo durante aprox. 10 minutos para
disolver el alginato del núcleo de la perla. El tiempo de disolución adecuado depende del peso
molecular y la pureza del alginato, así como también de la susceptibilidad del producto de encap-
sulación con respecto a la solución de despolimerización.
16. Drene la solución de despolimerización.
17. Bombee 150 mL de tampón de lavado MOPS, vuelva a suspender las cápsulas y transfiéralas al
frasco colector de perlas.
18. Transfiera las cápsulas al medio de cultivo y cultívelas.
65
células (o de acuerdo con las nece-
6
B-395 Pro Manual de instrucciones, versión E
6 Manejo
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