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COLETA E ARMAZENAGEM DAS AMOSTRAS
Colete sangue para tubos de punção venosa simples, sem
quaisquer aditivos e evitando a hemólise. Deixe o coágulo
do sangue à temperatura ambiente (18-28 °C) durante 20 a
60 minutos. Centrifugue à temperatura ambiente, a
~2000 g, durante 15 minutos. Decante o soro.
As amostras de soro podem ser conservadas refrigeradas
de 2-8 °C por até 1 mês. Para uma conservação mais
prolongada, mantenha as amostras a ≤-20 ºC. Estas
amostras são estáveis durante pelo menos 2 anos a
≤-20 ºC.
1. Diluição de amostras de soro
• Antes de fazer a medição, dilua as amostras de soro a
1:10 com o tampão de detecção (B-LFMRP-CB)
(misture 20 µL da amostra com 180 µL do tampão de
detecção, em um tubo de ensaio).
• Misture bem (ex: utilizando um vortex).
2. Procedimento e leitura do teste de fluxo lateral
• Carregue os parâmetros específicos do lote a partir do
cartão de chip RFID.
• Adicione 60 µL do amostra diluída no cassete do teste.
• Incube durante 12 minutos +/-1 minuto (usando um
cronômetro).
• Coloque o cassete do teste no bandeja do leitor de
cassete.
• Valide o cassete do teste no Quantum Blue
pressione o botão de início (<ENTER>) imediatamente.
• Para controles Baixo / Alto: Repita o passo 2 usando
60 μL do controle em vez da amostra de soro diluída.
Nota: Por favor, leia as instruções do Manual do Quantum
®
Blue
Reader para conhecer as funções, iniciar e operar o
leitor; especialmente como selecionar métodos e introduzir
os parâmetros através da leitura do cartão RFDI.
• Se a precisão do teste não se correlacionar com os
limites estabelecidos e as repetições excluírem erros
técnicos, verifique o seguinte: i) pipetagem, temperatura
e tempo dos diferentes passos, ii) data de validade dos
reagentes e iii) condições do armazenamento e
incubação.
• A autocalibração quando for iniciado no Quantum Blue
Reader (Verificação de calibração) tem que ser válida.
VALIDAÇÃO DOS RESULTADOS
• Num resultado válido, a Linha de Controle (C) tem que
ser sempre visível (ver Figuras 1A e 1B). Este é um
teste de controle/validação que não pode ser usado
para interpretar a Linha de Teste (T). Se a Linha de
Teste (T) não for detectável após os 12 min de
incubação (Figura 1A), a concentração de MRP8/14
presente na amostra é inferior ao limite de detecção. Se
a Linha de Teste (T) for detectável após os 12 min de
incubação (Figura 1B), a concentração da MRP8/14
presente é calculada pelo Quantum Blue
Revision date: 2016-11-23
PROCEDIMENTO DO ENSAIO
®
Reader e
CONTROLE DE QUALIDADE
®
Reader.
• Se apenas a Linha de Teste (T) for detectável após os
12 min de incubação (Figura 1C), o resultado do teste é
inválido e o teste de MRP8/14 tem que ser repetido
com outro cassete.
• Se a linha de controle (C) e se a linha de ensaio (T) não
forem detectáveis após a incubação (figura 1D), o
resultado do ensaio é inválido e, o ensaio tem de ser
repetido utilizando outro cassete de teste.
• Como o Quantum Blue
quantitativa das Linhas de Teste (T) e de Controle (C),
há uma validação adicional da Linha de Controle (C).
Se a intensidade do sinal da Linha de Controle (C) for
inferior à determinada para esse lote após os 12 min de
incubação, o resultado do teste é inválido e o teste de
MRP8/14 tem que ser repetido com outro cassete.
ESTANDARDIZAÇÃO E INTERPRETAÇÃO
• O teste de fluxo lateral é calibrado com a sCAL ELISA
da BÜHLMANN (código para pedido: EK-MRP8/14).
• O
Quantum
curva padrão específica ao lote para calcular a
concentração de MRP8/14. O intervalo de teste é
definido entre 0,5 e 10 µg/mL.
• Para medições quantitativas de amostras com leitura
acima de 10 µg/mL, dilua as amostras de soro mais
uma vez a 1:10 (diluição total resultante de 1:100) e
teste novamente de acordo com o procedimento de
teste.
A
concentração
multiplicada pelo fator do volume recíproco para se
obter o resultado final.
• Os reagentes fornecidos com este kit são otimizados
para medir MRP8/14 humano em amostras de soro.
• Os resultados de MRP8/14 podem ser utilizados para
complementar
diagnóstico possa ser estabelecido.
O teste de Quantum Blue® sCAL ajuda a estabelecer
rapidamente uma estimativa inicial da situação inflamatória
do paciente.
Os valores de referência a seguir podem ajudar a
caracterizar a situação inflamatória de um paciente. Os
®
pacientes com AR* (n = 20) apresentaram níveis médios
de MRP8/14 sérico de 6,25 µg/mL (DP: 3,43 µg/mL),
enquanto os pacientes que estavam respondendo ao
tratamento (n = 20) apresentaram níveis médios de
2,92 µg/mL (DP: 1,45 µg/mL) (ref. 1, 2).
Os valores normais de MRP8/14 foram determinados
usando-se amostras de soro de doadores de sangue
aparentemente saudáveis e assintomáticos (homens e
mulheres adultos na faixa de idade de 18 - 70 anos). No
total, 122 amostras de soro foram analisadas com EK-
MRP8/14
devido
inclinação = 0,93) com o LF-MRP25.
19/24
®
Reader permite a avaliação
DE RESULTADOS
Blue
®
Reader
medida
deve
outras
informações
RESULTADOS E INTERPRETAÇÃO
à
boa
correlação
utiliza
uma
então
ser
LIMITAÇÕES
para
que
o
2
(R
= 0,94,
LF-MRP25
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