3M Petrifilm 6402 Manual Del Usuario página 45

SÄILYTYS JA HÄVITTÄMINEN
Säilytä avaamattomat Petrifilm-alustapussit jääkaapissa tai pakastimessa alle 8°C:n (46ºF) lämpötilassa tai sitä kylmemmässä. Ota pussi
esiin juuri ennen käyttöä ja anna avatun pussin lämmetä huoneen lämpötilaan ennen avaamista. Siirrä käyttämättä jääneet alustat takaisin
pussiin. Sulje pussi taittamalla sen pää ja teippaamalla se kiinni. Älä säilytä avattuja pusseja jääkaapissa, etteivät ne altistu kosteudelle. Avatut
ja uudelleen suljetut pussit säilyvät viileässä, kuivassa paikassa. Säilytysaika on enintään yksi kuukausi. Suosittelemme säilyttämään avatut
Petrifilm-alustapussit pakastimessa (katso selostus alla), jos laboratorion lämpötila on yli 25°C (77ºF) ja/tai laboratorio sijaitsee alueella, jossa
suhteellinen kosteus on yli 50% (poikkeuksena ilmastoidut tilat).
Avattuja alustapusseja pakastimessa säilytettäessä ne on laitettava suljettavaan astiaan. Kun otat pakastetut Petrifilm-alustat käyttöön, avaa astia,
ota esiin tarvittava määrä alustoja ja laita loput alustat välittömästi pakastimeen suljetussa astiassa. Alustoja ei saa käyttää viimeisen käyttöpäivän
jälkeen. Avattujen pussien säilyttämiseen käytetyssä pakastimessa ei saa olla automaattisulatusta, sillä sulatusjakso altistaa alustat jatkuvasti
kosteudelle, mikä saattaa tuhota alustat.
Älä käytä alustoja, jotka ovat värjäytyneet oranssiksi tai ruskeaksi. Viimeinen käyttöpäivä ja eränumero on merkitty jokaiseen
Petrifilm-pakkaukseen. Eränumero on merkitty myös jokaiseen yksittäiseen alustaan.
Petrifilm RCC –alustat saattavat käytön jälkeen sisältää mikro-organismeja, jotka voivat aiheuttaa biosaastevaaran. Hävitä alustat teollisuudessa
voimassa olevia määräyksiä noudattaen.
Käyttö
Näytteen valmistus
1. Käytä sopivaa steriiliä laimenninta:
Butterfieldin fosfaattipuskurointi
tislattu vesi.
Älä käytä laimentimia, jotka sisältävät sitraattia, bisulfaattia tai trisulfiittia, sillä ne voivat estää kasvua. Jos sitraattipuskuri
indikoidaan vakiomenetelmin, korvaa jollain yllä luetelluista puskureista lämmitettynä 40-45 asteeseen (104-113ºF).
2. Sekoita tai homogenoi näyte.
3. Mikro-organismien optimaalinen kasvu ja palautuminen voidaan saavuttaa säätämällä näytteen pH-arvoksi 6.5 - 7.5. Käytä happamille
näytteille pH 1N NaOH. Käytä emäksisille tuotteille pH 1N HCl.
Maljaus
1. Aseta Petrifilm RCC -alusta tasaiselle, vaakasuoralle alustalle (katso kuva a).
2. Nosta päällimmäinen kalvo ja annostele pipetillä kohtisuoraan 1 mL näytettä keskelle alimmaista kalvoa (katso kuva b).
3. Rullaa päällimmäinen kalvo näytteen päälle ilmakuplien estämiseksi (katso kuva c).
4. Aseta muovinen levitin litteä puoli alaspäin alustan keskelle (katso kuva d). Paina varovasti levittimen keskeltä, jotta näyte leviää tasaisesti.
Levitä inokulaatti koko Petrifilm –alustan kasvualueen päälle ennen geeliytymistä. Älä vedä levitintä kalvoa pitkin.
5. Ota levitin pois ja anna maljan olla paikoillaan vähintään 1 minuutin ajan, jotta geeli jähmettyy.
Inkubointi
1. Inkuboi alustoja vaaka-asennossa kirkas puoli ylöspäin pinottuina enintään 20 alustan pinoihin. Useita eri inkubointiaikoja ja –lämpötiloja
voidaan käyttää paikallisista referenssimenetelmistä riippuen, joista osa on lueteltu alla olevassa osiossa Erikoisohjeet validoituja menetelmiä
varten. **Katso AFNOR inkubointilämpötilapoikkeus prosessoidulle sianlihalle.
2. Seuraa koliformien kasvua alustoilla prosessin kannalta sopivina ajankohtina 24 ± 2 h inkubointiajan kuluessa riippuen halutusta
informaatiosta ja käytetystä menetelmästä (kuvattu alla*). Koska lämpötila vaikuttaa koliformien kasvuun, ajan, jonka Petrifilmit ovat poissa
lämpökaapista, tulisi olla mahdollisimman lyhyt, jotta havaintoaika ei pitenisi.
Tulosten tulkinta ja pesäkkeiden laskeminen
Tutustu tulkintaa varten kohtaan "Erikoisohjeet validoituja menetelmiä varten"
1. Epäsuora, takaa tuleva valo voi helpottaa keltaisten alueiden varhaista havaitsemista Petrifilm RCC -alustalla. Koliformipesäkkeet
voivat ilmaantua 6 tuntia inkuboinnista. Ne ilmenevät hienoina keltaisina alueina, jotka ovat pesäkkeiden muodostumisyksiköitä (CFU)
(katso kuva e). Jatka inkubointia havaitaksesi lisää happamia alueita ja/tai happamiin alueisiin liittyviä punaisia pesäkkeitä. Älä laske
vaahdon pinnalla olevia pesäkkeitä, koska elatusaineen selektiivinen vaikutus ei ulotu niihin. Älä laske ilmakuplista johtuvia artefaktoja,
joita saattaa myös esiintyä.
Jotkut koliformit tuottavat suuria määriä happoa. Näillä organismeilla keltaiset alueet voivat sulautua toisiinsa, kun pesäkkeitä on alustalla
noin 20 kpl. Pyöreä kasvualue on kooltaan noin 20 cm
yhden tai useamman edustavan ruudun happamat alueet ja määrittämällä näin ruudun keskiarvo. Koko alustan pesäkeluku saadaan
kertomalla keskiarvo 20:llä.
2. Pesäkkeet voidaan tarvittaessa eristää lisätunnistamista varten. Nosta päällyskalvoa ja poimi pesäke geelistä (katso kuva h).
Testaa vakiomenetelmin.
, 0% peptoni-vesi , peptoni-suolaliuos
1, 3 3
. Alustoilla, joilla on yli 50 hapanta aluetta, voidaan pesäkeluku arvioida laskemalla
2
, suolavesiliuos (0,85-0,90%), bisulfiiniton leteeniliuos tai
2, 3
2