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N N I I C C H H T T M M I I T T G G E E L L I I E E F F E E R R T T E E S S , , A A B B E E R R B B E E N N Ö Ö T T I I G G T T E E S S M M A A T T E E R R I I A A L L
Kat. Nr. 210200 Probenapplikatorkämme (1 x 10)
Kat. Nr. 210300 Probenapplikatorkämme (5 x 10)
Kat. Nr. 321200 Pentavalent Antiserum (für Urin- und Serumproben) 3 ml
Kat. Nr. 321300 Pentavalent Antiserum (für Urin- und Serumproben) 10 x 3 ml
Kat. Nr. 210100 Einweg-Probengefäße (100)
Kat. Nr. 3100 REP-Prep-Lösung
P P R R O O B B E E N N E E N N T T N N A A H H M M E E U U N N D D V V O O R R B B E E R R E E I I T T U U N N G G
Frisch entnommene Serum- oder Urinprobe ist das Untersuchungsmaterial der Wahl. Für ein
Standard-5-Bandenmuster6 können Serumproben bei 15 bis 30 °C bis zu 4 Tage, bei 2 bis 6 °C bis zu
2 Wochen, oder bei -20 °C 6 Monate gelagert werden. Die Beta-2-Globulinbande (Komplement C3)
degeneriert allerdings bei Lagerung sehr schnell. Die Urinproben können im Kühlschrank bei 2 bis
6 °C bis zu 72 Stunden oder 2 Wochen bei -20 °C aufbewahrt werden. Urinproben zunächst
unkonzentriert und unverdünnt verwenden, außer das Gesamtprotein ist bekannterweise über 1000
mg/l.
S S C C H H R R I I T T T T - - F F Ü Ü R R - - S S C C H H R R I I T T T T M M E E T T H H O O D D E E
1. U U r r i i n n : 35 µl Probe in die entsprechenden Einweg-Probengefäße pipettieren.
Verdunstung schützen.
S S E E R R U U M M : Jede Probe mit dem IFE-Verdünnungspuffer 1+2 verdünnen. 35 µl der verdünnten
Probe in die entsprechenden Einweg-Probengefäße pipettieren.
schützen.
2. Elektrophoreseeinheit einschalten und:
i)
S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s B B e e n n u u t t z z e e r r : Die Probenplatte vorsichtig auf den Applikatoreinschub stellen. Darauf
achten, dass die Platte in Position fest eingerastet ist.
ii) S S A A S S - - 3 3 B B e e n n u u t t z z e e r r : Mit den Haltestiften der Probenbasis die Probenplatte vorsichtig einrichten.
Sicherstellen, dass die Platte richtig eingesetzt ist.
3. Das Gel aus der Verpackung nehmen und:
S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s B B e e n n u u t t z z e e r r : 400 µL REP-Prep-Lösung auf die Kühlplatte verteilen. Das Gel mit der
i)
Agaroseseite nach oben auf die Kühlplatte legen, positive und negative Seite an den passenden
Elektrodenhaltern ausrichten. Darauf achten, dass unter dem Gel keine Luftblasen sind.
ii) S S A A S S - - 3 3 B B e e n n u u t t z z e e r r : Die Führungsschiene auf die Stifte setzen und 400 µl REP Prep auf die
Kammermitte verteilen. Das Gel mit der Agaroseseite nach oben in die Kammer legen und mit
Hilfe der Schiene die positive und negative Seite an den entsprechenden Elektrodenhaltern
ausrichten. Darauf achten, dass unter dem Gel keine Luftblasen sind.
4. Die Geloberfläche mit einem Blotter C blotten und Blotter verwerfen.
5. i i ) ) S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s B B e e n n u u t t z z e e r r : Die Abdeckung über Gel und Elektroden geben und für einen guten
Kontakt 5 Sekunden lang fest aufdrücken.
i i i i ) ) S S A A S S - - 3 3 B B e e n n u u t t z z e e r r : Die Elektroden auf den Elektrodenhaltern befestigen, damit sie mit den
Gelblöcken in Kontakt stehen.
6. 2 Applikatorkamm-Halterungen in Position auf dem Gerät anbringen, (SAS-3 Benutzer: Schlitz A
und 10).
7. Die Pentavalent Screen Elektrophorese durchführen:
i i ) )
S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s B B e e n n u u t t z z e e r r :
Elektrophorese: 100 Volt, 18 Min., 20°C
Inkubationsschritt 1: 8 Min, 37°C (inkubieren)
Inkubationsschritt 2: 8 Min., 40°C (D-Blot)
SAS-1 PENTAVALENT SCREEN
15
Proben vor
Proben vor Verdunstung
Deutsch
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