Dilución De Bibliotecas - Illumina NextSeq 1000 Guia Del Usuario

Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000
Dilución de bibliotecas
Si se utilizan la desnaturalización y la dilución en el instrumento, este paso diluye las bibliotecas hasta
la concentración de carga aplicable. Un volumen adicional opcional del 2 % de PhiX
diversidad de la base, un control positivo o criterios de medición adicionales. El porcentaje de volumen
adicional de PhiX debe aumentarse para las bibliotecas con una diversidad de base menor.
Si la desnaturalización y la dilución de las bibliotecas se hacen manualmente, utilice la Guía de
desnaturalización y dilución de bibliotecas con NextSeq 1000 y 2000 (n.º de
documento 1000000139235). Este paso únicamente es de aplicación a la desnaturalización y la dilución
en el instrumento.
Dilución de la biblioteca a 2 nM
1. [Opcional] Retire el control PhiX a 10 nM preparado del almacenamiento con unas temperaturas
comprendidas entre -25 °C y -15 °C.
Solo se requiere PhiX para una adición opcional o si se va a realizar un experimento solo de PhiX.
2. [Opcional] Descongele el PhiX a temperatura ambiente durante cinco minutos y, a continuación,
cuantifique utilizando un método basado en la fluorescencia, como Qubit, para confirmar la
concentración de PhiX.
Si la cuantificación no es posible, siga con la concentración de 10 nM.
3. Agite en vórtice la biblioteca o el PhiX brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante
un minuto.
4. Si usa el RSB con Tween 20 como diluyente, prepare al menos 24 µl de bibliotecas a 2 nM en un
microtubo de baja unión.
Para ver las instrucciones de volumen adicional de PhiX, consulte
(opcional) en la página 46.
5. Agite en vórtice brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante un minuto.
Dilución de la biblioteca a 2 nM para la concentración de carga
1. Combine los volúmenes siguientes en un microtubo de baja unión para preparar 24 µl de biblioteca
diluida con la concentración de carga correspondiente:
1
PhiX es una biblioteca de Illumina pequeña y lista para usar con una representación equilibrada de nucleótidos.
N.º de documento 1000000109376 v05 ESP
Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
1
proporciona una
Adición de un control PhiX
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