Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones
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Stem-Trol Control Cells
IM3632
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Português Brasil (PT-BR) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
APPENDIX . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
REFERENCES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
© 2019 Beckman Coulter, Inc. All rights reserved.
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Manuales relacionados para Beckman Coulter IM3632

Resumen de contenidos para Beckman Coulter IM3632

  • Página 1 REFERENCES ........... . © 2019 Beckman Coulter, Inc. All rights reserved.

  • Página 2: Intended Use

    Stem-Trol Control Cells IM3632 For In Vitro Diagnostic Use INTENDED USE Stem-Trol Control Cells is an assayed quality control product for immunophenotyping analysis using CD45 and / or CD34 monoclonal antibodies reagents and flow cytometry. It provides a positive cell control that is processed in the same manner as a blood specimen when Stem-Trol Control Cells are spiked into a peripheral whole blood sample.

  • Página 3: Materials Required, But Not Provided

    11. Incubation or mixing times or temperatures other than those specified may give erroneous results. 12.Erroneous results may occur if the flow cytometer is not properly aligned or standardized for fluorescence or if the cell populations are improperly gated. 13.Results determined using flow cytometers, lysing systems, or antibodies that are different from those used to determine the expected results may not fall within the expected range.
  • Página 4 NOTE: In order to standardize the analysis, when receiving new Stem-Kit Reagents, and at daily intervals afterwards, run a process check by staining Stem-Trol Control Cells with a normal peripheral blood sample from a healthy donor. Furthermore, as Stem-Trol Control Cells are stabilized cells (i.e. nonviable cells), 7-AAD Viability Dye staining may be visually checked on Stem-Trol Control Cells (see the heading: Histogram Creation).
  • Página 5 Reagents & Samples Volume 1X NH Cl Lysing Solution 2 mL Vortex – Incubate at room temperature for 10 minutes. Protect from light Stem-Count Fluorospheres 100 µL MANUAL GATING AND ANALYSIS METHOD Protocol Setup The flow cytometer must be equipped to detect Forward Scatter, Side Scatter and four fluorescence channels. For the FL3 channel (for Stem-Count or Flow-Count Fluorospheres monitoring) use a 620 nm band pass filter.
  • Página 6 7. Histogram 5 – Create an amorphous Region H on Histogram 5 to surround all Stem-Count or Flow-Count Fluorospheres, including doublets. The region H should be located at the top right corner of the Histogram 5. NOTE: Be sure that Region H is drawn as an AMORPHOUS region. 8.
  • Página 7 Verify the way the region boundaries were set. If necessary, repeat the preparation with new test tubes. Acquire and analyze both the new and the previous series of tubes. Compare the two results. If there is no agreement, call your local Beckman Coulter Representative. B60231–AE...

  • Página 8: Additional Information

    TRADEMARKS Beckman Coulter, the stylized logo, and the Beckman Coulter product and service marks mentioned herein are trademarks or registered trademarks of Beckman Coulter, Inc. in the United States and other countries. ADDITIONAL INFORMATION www.beckmancoulter.com Symbols Key Glossary of Symbols is available at beckman.com/techdocs (document number B60062) B60231–AE...
  • Página 9 Cellules de contrôle Stem-Trol IM3632 Réservé aux dosages diagnostiques in vitro UTILISATION Stem-Trol Control Cells est un produit de contrôle de qualité dosé pour l’analyse de l’immunophénotypage utilisant des réactifs aux anticorps monoclonaux CD45 et/ou CD34 et la cytométrie en flux. Il fournit un contrôle cellulaire positif qui est traité...
  • Página 10 8. Utiliser une pipette jaugée préalablement ou une pipette à répétition pour délivrer les échantillons et les Stem-Trol Control Cells, au risque d’obtenir des résultats erronés dans le cas contraire. 9. Respecter les techniques de pipetage recommandées par le fabricant des pipettes pour assurer un pipetage précis et exact des échantillons et des Stem-Trol Control Cells, au risque d’obtenir des résultats erronés dans le cas contraire.
  • Página 11 • Pipettes calibrées standard (20 µL, 100 µL, 2 mL) et embouts. • Agitateur vortex. • Chronomètre. • Cytomètre en flux. • Logiciel système stemCXP UNIQUEMENT pour l’analyse automatisée de Stem-Trol Control Cells sur cytomètres en flux FC 500 équipés du logiciel CXP. PROCÉDURE Pour les analyses automatisées, référez-vous au stemCXP System Guide (Guide du système stemCXP) fourni avec le logiciel système stemCXP pour consulter les instructions complètes.
  • Página 12 10.Avant l’acquisition, pipeter 100 µL de Stem-Count ou Flow-Count Fluorospheres dans le tube d’échantillon. 11. Agiter au vortex pendant 5 secondes immédiatement après chaque addition. Conserver à une température comprise entre 2–8 °C. Agiter à nouveau au vortex immédiatement avant l’acquisition par cytométrie en flux. IMPORTANT: Risque de résultats erronés si l’échantillon est analysé...
  • Página 13 Les Histogrammes 5 à 7 sont destinés à surveiller les paramètres importants pendant l’étape d’acquisition. Ces derniers comprennent le discriminateur du Forward Scatter (diffusion avant), le nombre d’événements CD45 à recueillir et l’accumulation correcte de singulets fluorosphères. L’Histogramme 8 est destiné à discriminer et analyser les événements viables des événements non viables en cas de besoin.
  • Página 14 Réglage du cytomètre en flux 1. S’assurer que le cytomètre en flux est correctement aligné et calibré pour la diffusion de la lumière et l’intensité de fluorescence selon les recommandations du fabricant et du laboratoire. Vérifier que la compensation de couleur est réglée sur le fonctionnement standard.

  • Página 15: Informations Supplémentaires

    Beckman Coulter. MARQUES Beckman Coulter, le logo stylisé et les marques des produits et des services Beckman Coulter mentionnées ici sont des marques ou des marques déposées de Beckman Coulter, Inc. aux États-Unis et dans d’autres pays.
  • Página 16 Stem-Trol-Kontrollzellen IM3632 In-vitro-Diagnostikum VERWENDUNGSZWECK Stem-Trol Control Cells stellen ein Assay-Qualitätskontrollprodukt für die Analyse zur Immunphänotypisierung mit CD45- und/oder CD34-monoklonalen Antikörper-Reagenzien und Durchflusszytometrie dar. Es liefert eine positive Zellkontrolle, die auf gleiche Weise wie eine Blutprobe verarbeitet wird, wobei die Stem-Trol Control Cells in eine vollumfängliche Blutprobe eingeimpft werden.
  • Página 17 8. Eine kalibrierte positive Versetzungs- oder Übertragungspipette verwenden, um Proben und Stem-Trol Control Cells zu verabreichen und fehlerhafte Ergebnisse zu vermeiden. 9. Es müssen die vom Pipetten-Hersteller empfohlenen Pipettiertechniken angewendet werden, um eine genaue und präzise Pipettierung der Proben und der Stem-Trol Control Cells zu ermöglichen und fehlerhafte Ergebnisse zu vermeiden.
  • Página 18 • Kalibrierte Standardpipetten (20 µL, 100 µL, 2 mL) mit Spitzen. • Vortex-Rüttler • Zeitgeber • Durchflusszytometer. • stemCXP-Systemsoftware NUR für die automatisierte Analyse der Stem-Trol Control Cells an FC 500-Durchflusszytometern mit der CXP-Software. DURCHFÜHRUNG Eine vollständige Anleitung zur automatischen Analyse ist im stemCXP System Guide (System-Handbuch) der stemCXP-Systemsoftware enthalten.
  • Página 19 9. Die Stem-Count oder Flow-Count Fluorospheres vorsichtig vermischen, indem Sie das Röhrchen vor der Verwendung 3 bis 5 mal umdrehen. Ein zu starkes Vermischen ist nicht ratsam, um die Bildung von Luftblasen zu vermeiden. 10.Vor der Entnahme 100 µL von Stem-Count oder Flow-Count Fluorospheres in das Probenröhrchen pipettieren. 11.
  • Página 20 Die Histogramme 1 bis 4 dienen der Charakterisierung von CD34 -HPC. Dieser Prozess kann bis zum Analyseschritt verzögert werden. Diese ersten vier Histogramme werden gemäß den ISHAGE-Richtlinien für die CD34 -Zellbestimmung durch die Durchflusszytometrie aufgestellt (2,3). Die Histogramme 5 bis 7 sind zur Überwachung der Parameter gedacht, die während der Probenentnahme wichtig sind.
  • Página 21 8. Histogramm 8 – „A“ zu Histogramm 8 zuweisen, um alle CD45 -Ereignisse anzuzeigen. Einstellung Durchflusszytometer 1. Das Durchflusszytometer muss richtig justiert und für eine leichte Streuung und Fluoreszenzintensität entsprechend den Angaben des Herstellers und den Laborrichtlinien standardisiert sein. Überprüfen, ob die Farbkompensation auf Standardbetrieb eingestellt ist.

  • Página 22: Weitere Informationen

    Probenröhrchen erfassen und analysieren. Die beiden Ergebnisse vergleichen. Wenn keine Übereinstimmung vorliegt, wenden Sie sich an Ihren örtlichen Beckman Coulter-Mitarbeiter. HANDELSMARKEN Beckman Coulter, das stilisierte Logo und die in diesem Dokument erwähnten Beckman Coulter-Produkt- und -Dienstleistungsmarken sind in den USA und anderen Ländern eingetragene Marken von Beckman Coulter, Inc. WEITERE INFORMATIONEN www.beckmancoulter.com...
  • Página 23 Cellule di controllo Stem-Trol IM3632 Per uso diagnostico in vitro USO PREVISTO Stem-Trol Control Cells è un prodotto di controllo di qualità dosato per analisi di immunofenotipizzazione mediante reagenti con anticorpi monoclonali CD45 e/o CD34 e citometria a flusso. Tale prodotto fornisce un controllo cellulare positivo che viene trattato come un campione di sangue quando Stem-Trol Control Cells viene aggiunto in un campione di sangue intero periferico.
  • Página 24 9. Utilizzare tecniche di pipettatura consigliate dal produttore di pipette per garantire una pipettatura accurata e precisa di campioni e di Stem-Trol Control Cells ed evitare il verificarsi di risultati errati. 10.Ciascun lotto di Stem-Trol Control Cells presenta una concentrazione specifica di cellule. Quando si calcolano i risultati della conta assoluta, assicurarsi che venga utilizzata la concentrazione nominale corretta.
  • Página 25 • Software di sistema stemCXP SOLO per analisi automatica di Stem-Trol Control Cells su citometri a flusso FC 500 dotati di software CXP. PROCEDURA Se viene utilizzata l’analisi automatica, fare riferimento alla stemCXP System Guide (Guida al sistema stemCXP) in dotazione al software di sistema stemCXP per istruzioni complete. Per l’analisi manuale, fare riferimento alle istruzioni accluse alla confezione di Stem-Kit Reagents e alla procedura seguente.
  • Página 26 IMPORTANTE: Rischio di ottenere risultati errati in caso di analisi del campione trascorsa 1 ora dall’aggiunta di Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres. I campioni preparati devono essere analizzati entro 1 ora dall’aggiunta di Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres. Riepilogo della preparazione (etichetta della provetta: TROL45/34/7-AAD) Reagenti e campioni volume 20 µL...
  • Página 27 Creazione delle Regioni Creare le regioni come segue: 1. Istogramma 1. Creare una regione rettilinea A in modo da includere tutti i leucociti CD45 ed eliminare le piastrine, i residui di eritrociti e gli aggregati. 2. Istogramma 1. Creare una regione amorfa E nei linfociti (CD45 brillante, scatter laterale basso). 3.
  • Página 28 Calcolo di CD34 Stem-Trol Control Cells Uso dei risultati della citometria a flusso regolati automaticamente con la concentrazione nominale di Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres ottenuta utilizzando il software System II (versione 3.0) e un citometro a flusso COULTER EPICS XL/XLMCL. Per ottenere le determinazioni della conta assoluta calcolate automaticamente nei citometri a flusso COULTER EPICS XL / XL-MCL, è...

  • Página 29: Informazioni Aggiuntive

    Beckman Coulter di zona. MARCHI COMMERCIALI Beckman Coulter, il logo stilizzato ed i marchi commerciali dei prodotti e servizi di Beckman Coulter menzionati qui, sono marchi commerciali o marchi commerciali registrati di Beckman Coulter, Inc., negli Stati Uniti e in altri paesi.
  • Página 30 Células de control Stem-Trol IM3632 Para uso diagnóstico in vitro INDICACIONES Las Stem-Trol Control Cells es un producto de control de calidad preparado para el análisis del inmunofenotipo utilizando los reactivos anticuerpos monoclonales CD45 o CD34 y la citometría de flujo. Asimismo, proporciona un control positivo de células que se procesa de la misma manera que una muestra de sangre cuando las Stem-Trol...

  • Página 31: Clasificación De Material Peligroso Según El Sga

    8. Utilice un desplazamiento positivo calibrado o una pipeta repetidora para dispensar las muestras y las Stem-Trol Control Cells, de lo contrario, pueden generarse resultados erróneos. 9. Utilice las técnicas de pipeteo que recomienda el fabricante de la pipeta a fin de garantizar un pipeteo exacto y preciso de la muestra y de las Stem-Trol Control Cells;...

  • Página 32: Procedimiento

    • Pipetas de calibración estándar (20 µL, 100 µL, 2 mL) y puntas. • Mezclador automático (tipo Vórtex). • Cronómetro. • Citómetro de flujo. • Software del sistema stemCXP SOLO para el análisis automatizado de Stem-Trol Control Cells en citómetros de flujo FC 500 equipados con el software CXP.
  • Página 33 IMPORTANTE: Existe riesgo de resultados erróneos si se pipetean burbujas de aire. La mezcla en exceso de Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres puede provocar la formación de burbujas de aire. Evite mezclar en exceso las Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres y no pipetee las burbujas de aire dentro de los tubos de muestra que contienen los tubos de muestra.
  • Página 34 7. Crear un Histograma 7 correspondiente a Tiempo frente a FL3 Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres. 8. Crear un Histograma 8 con FL4 7-AAD frente a dispersión lateral. Los Histogramas de 1 a 4 están destinados a caracterizar las células CD34 HPC, un proceso que puede retrasarse hasta la fase de análisis.
  • Página 35 7. Histograma 7 – Asignar la Región H amorfa en el Histograma 7 con el fin de visualizar todas las Stem-Count o Flow-Count Fluorospheres, incluidos los dobletes. 8. Histograma 8 – Asignar la Región “A” al Histograma 8 con el fin de visualizar todos los eventos CD45 Ajuste del citómetro de flujo 1.

  • Página 36: Marcas Comerciales

    Beckman Coulter. MARCAS COMERCIALES Beckman Coulter, el logotipo estilizado y las marcas de productos y servicios de Beckman Coulter aquí mencionadas son marcas comerciales o marcas comerciales registradas de Beckman Coulter, Inc. en Estados Unidos y otros países.
  • Página 37 Lista de símbolos El glosario de símbolos está disponible en beckman.com/techdocs (número de documento B60062) B60231–AE 37 of 128...
  • Página 38 Células de controlo Stem-Trol IM3632 Para fins de diagnóstico in vitro UTILIZAÇÃO PREVISTA Stem-Trol Control Cells é um produto de controlo de qualidade ensaiado para análise por imunofenotipagem utilizando reagentes de anticorpos monoclonais CD45 e/ou CD34 e citometria de fluxo. Fornece um controlo de células positivo que é...

  • Página 39: Materiais Necessários, Mas Não Fornecidos

    8. Utilize pipetas de deslocamento positivo ou de repetição calibradas para dispensar amostras e Stem-Trol Control Cells, caso contrário poderá obter resultados errados. 9. Utilize as técnicas de pipetagem recomendadas pelo fabricante da pipeta para garantir uma pipetagem correta e precisa de amostras e Stem-Trol Control Cells sob pena de obter resultados errados. 10.Cada lote de Stem-Trol Control Cells tem uma concentração específica de células.
  • Página 40 • Cronómetro. • Citómetro de fluxo. • Software do sistema stemCXP APENAS para análises automatizadas de Stem-Trol Control Cells em citómetros de fluxo FC 500 equipados com software CXP. PROCEDIMENTO Para obter informações sobre análises automáticas, consulte o stemCXP System Guide (Manual do sistema stemCXP) fornecido com o software do sistema stemCXP para obter instruções completas.
  • Página 41 10.Antes da aquisição, pipete 100 µL de Stem-Count Fluorospheres ou Flow-Count Fluorospheres para o tubo de amostra. 11. Misture no vortex durante 5 segundos imediatamente após cada adição. Armazene a uma temperatura entre 2 e 8 °C. Repita o processo de mistura no vortex imediatamente antes da aquisição por citometria de fluxo. IMPORTANTE: Risco de resultados errados se a amostra for analisada mais de 1 hora após adicionar Stem-Count Fluorospheres ou Flow-Count Fluorospheres.
  • Página 42 (International Society of Hematotherapy and Graft Engineering) para a determinação de células CD34 (2,3) por citometria de fluxo. Os Histogramas 5 a 7 servem para monitorizar parâmetros que são importantes durante a etapa de aquisição. Estes incluem o discriminador de Forward Scatter (Dispersão frontal), o número de eventos CD45 a serem recolhidos e a acumulação correta de singletos de fluoroesferas.
  • Página 43 Configuração do citómetro de fluxo 1. Certifique-se de que o citómetro de fluxo está devidamente alinhado e normalizado em termos de dispersão da luz e intensidade de fluorescência de acordo com as recomendações do fabricante e do laboratório. Verifique se a compensação de cor está configurada para funcionamento normal. Consulte o manual do instrumento para obter instruções adicionais.

  • Página 44: Marcas Comerciais

    Se não houver concordância, contacte o seu representante local da Beckman Coulter. MARCAS COMERCIAIS Beckman Coulter, o logótipo estilizado e as marcas de produtos e serviços supramencionados da Beckman Coulter são marcas comerciais ou marcas comerciais registadas da Beckman Coulter, Inc. nos Estados Unidos e outros países.
  • Página 45 Stem-Trol kontrolceller IM3632 Til In Vitro diagnostisk brug TILSIGTET BRUG Stem-Trol Control Cells er et analyseret kvalitetskontrolprodukt til analyse af immunofænotypning ved hjælp CD45- og/eller CD34-monoklonale antistofreagenser og flowcytometer. Det giver en positiv cellekontrol, der behandles på samme måde som en blodprøve, når Stem-Trol Control Cells tilføres en perifer prøve af helblod.
  • Página 46 9. Brug de pipetteringsteknikker, der anbefales af pipetteproducenten for at sikre nøjagtig og præcis pipettering af prøverne og Stem-Trol Control Cells, idet der ellers kan forekomme fejlagtige resultater. 10.Hver lot af Stem-Trol Control Cells har en bestemt koncentration af celler. Sørg for, at den analyserede koncentration anvendes til fastlæggelse af resultater af absolut tælling.
  • Página 47 • stemCXP-systemsoftware automatiseret analyse Stem-Trol Control Cells på FC 500-flowcytometre udstyret med CXP-software. PROCEDURE For automatisk analyse, se stemCXP System Guide (stemCXP-systemvejledningen), som følger med stemCXP-softwarekittet for komplette instruktioner. For manuel analyse, se indlægssedlen til Stem-Kit Reagents og følgende fremgangsmåde. BEMÆRK: For at standardisere analysen skal der køres en proces, når der modtages nye Stem-Kit Reagents og herefter dagligt, ved at farve Stem-Trol Control Cells med en normal perifer...
  • Página 48 Klargøringsoversigt (etikette på prøverør: TROL45/34/7-AAD) Reagenser og prøver Volumen 20 µL CD45-FITC / CD34-PE 7-AAD levedygtighedsfarvestof 20 µL Fuldblod 100 µL Stem-Trol Control Cells 20 µL Vortex – Inkuber ved stuetemperatur i 20 minutter. Beskyt mod lys 2 mL 1X NH Cl Lysing Solution Vortex –...
  • Página 49 3. Histogram 2 – Opret en retlinjet region B på histogram 2 for at medtage alle CD34 -hændelser med lav til medium Side Scatter (sidelæns spredning). Indstil tællingen til at stoppe ved 75.000 hændelser (CD45 -hændelser) i histogram 2. 4. Histogram 3 – Opret en amorphous (amorf) region C på histogram 3 for at medtage alle samlede CD45 -hændelser.
  • Página 50 opnå fastlæggelse automatisk beregnede absolutte tællinger på COULTER EPICS XL/XL-MCL-flowcytometre, skal den korrekte Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres analyserede koncentration indtastes før indhentning af prøven. Indtast ”CAL” som navnet på de enkelte Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres i region G, og indtast værdien, for eksempel, 1000 i feltet CAL FACTOR (CAL-faktor) i dialogboksen STATISTICS (statistik) i menuen SET-UP SCREEN PROTOCOL (opsætning af skærmprotokol).

  • Página 51: Yderligere Oplysninger

    Beckman Coulter-repræsentanten. VAREMÆRKER Beckman Coulter, det stiliserede logo og de Beckman Coulter produkt- og servicemærker, der er omtalt heri, er varemærker eller registrerede varemærker tilhørende Beckman Coulter, Inc. i USA og andre lande. YDERLIGERE OPLYSNINGER www.beckmancoulter.com...
  • Página 52 Stem-Trol Kontrollceller IM3632 För in vitro diagnostiskt bruk AVSEDD ANVÄNDNING Stem-Trol Control Cells är en analyserad kvalitetskontrollprodukt för analys med immunfenotypning och användning av CD45- och/eller CD34-monoklonala antikroppsreagenser och flödescytometri. Den tillhandahåller en positiv cellkontroll som bearbetas på samma sätt som ett blodprov när Stem-Trol Control Cells används för att spetsa ett perifert helblodsprov.
  • Página 53 10.Varje lot Stem-Trol Control Cells har en specifik koncentration celler. Se till att korrekt analyserad koncentration används vid bestämning av absoluta antal. 11. Andra inkubations- eller blandningstider eller inkubations- eller blandningstemperaturer än de specificerade kan ge felaktiga resultat. 12.Felaktiga resultat kan uppstå om flödescytometern inte är rätt inställd eller standardiserad för fluorescens eller om cellpopulationerna är felaktigt gatade.
  • Página 54 METODBESKRIVNING För automatisk analys, se guiden för stemCXP-systemet som medföljer stemCXP-systemprogramvaran för fullständiga anvisningar. För manuell analys, se Stem-Kit Reagents bipacksedel och följande procedur. OBS! Kör en processkontroll för standardisering av analysen när nya Stem-Kit Reagents inkommer och dagligen efter det, genom färgning av Stem-Trol Control Cells med ett normalt perifert helblodsprov från en frisk donator.
  • Página 55 Beredningssammanfattning (provrörsetikett: TROL45/34/7-AAD) Reagenser och prover Volym 20 µL CD45-FITC / CD34-PE 7-AAD Viability Dye 20 µL Helblod 100 µL Stem-Trol Control Cells 20 µL Vortexa – inkubera i 20 minuter vid rumstemperatur. Skydda från ljus 1X NH Cl Lysing Solution 2 mL Vortexa –...
  • Página 56 3. Histogram 2 – skapa en rätlinjig region B på histogram 2 som ska inkludera alla CD34 -händelser med låg till intermediär Side Scatter (sidospridning). Ställ in ett stoppantal på 75 000 händelser (CD45 -händelser) i histogram 2. 4. Histogram 3 – skapa en amorf region C på histogram 3 som ska inkludera alla CD45 -klusterhändelser.
  • Página 57 Ange ”CAL” (kalibrering) som namn på region G för singletter av Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres och ange sedan värdet. Ange till exempel 1 000 i rutan CAL FACTOR (Kalibreringsfaktor) i dialogrutan STATISTICS (Statistik) på menyn SET-UP SCREEN PROTOCOL (Konfigurera screen-protokoll). Ange CAL-faktor (kalibreringsfaktor) för Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres: 1.

  • Página 58: Ytterligare Information

    Beckman Coulter. VARUMÄRKEN Beckman Coulter, den stiliserade logotypen och Beckman Coulters produkt- och tjänstemärken som nämns häri är varumärken eller registrerade varumärken som tillhör Beckman Coulter, Inc. i USA eller andra länder. YTTERLIGARE INFORMATION www.beckmancoulter.com Teckenförklaring för symboler...
  • Página 59 Stem-Trol Κύτταρα μάρτυρα IM3632 Για In Vitro διαγνωστική χρήση ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το Stem-Trol Control Cells είναι ένα προϊόν προσδιορισμού ελέγχου ποιότητας για την ανάλυση του ανοσοφαινότυπου με χρήση αντιδραστηρίων μονοκλωνικών αντισωμάτων CD45 ή/και CD34 και κυτταρομετρίας ροής. Περιλαμβάνει έναν θετικό μάρτυρα κυττάρων, ο οποίος υποβάλλεται σε επεξεργασία με τον ίδιο τρόπο...
  • Página 60 6. Αποφεύγετε την εξάτμιση και διαρροή των αντιδραστηρίων κλείνοντας σφιχτά τα φιαλίδια μετά την χρήση, ειδάλλως μπορεί να προκληθούν εσφαλμένα αποτελέσματα. 7. Το Stem-Trol Control Cells καθιζάνει μετά από μεγάλο χρονικό διάστημα. Επιβεβαιώνετε ότι τα κύτταρα έχουν επανεναιωρηθεί πλήρως πριν από τη χρήση. Αποφεύγετε την υπερβολική ανάμιξη ώστε να περιοριστεί ο...
  • Página 61 Προετοιμασία αντιδραστηρίου Το Stem-Trol Control Cells είναι ένα αιώρημα κυττάρων που είναι έτοιμο για χρήση. Απαιτείται σωστή ανάμιξη (περιδίνηση επί 10–12 δευτερόλεπτα) πριν από κάθε πρώτη μετάγγιση από το φιαλίδιο. Αποφεύγετε την υπερβολική ανάμιξη ώστε να περιοριστεί ο σχηματισμός φυσαλίδων αέρα. Μην αναρροφάτε φυσαλίδες αέρα. ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ...
  • Página 62 • Μεταγγίστε με ακρίβεια 20 µL Stem-Trol Control Cells στο σωληνάριο. • Περιδινήστε τα σωληνάρια για 5 δευτερόλεπτα. 5. Επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου (18–25 °C) για 20 λεπτά, προστατεύοντας από το φως. 6. Προσθέστε 2 mL του παρασκευασμένου 1X NH Cl Lysing Solution μέσα...
  • Página 63 ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για το Stem-Trol Control Cells, πρέπει να χρησιμοποιείται το ίδιο σχήμα οριοθέτησης και η ίδια σειρά 8 ιστογραμμάτων όπως ορίζονται για την ανάλυση δειγμάτων. Καθώς τα Stem-Trol Control Cells διαθέτουν χαρακτηριστικά μεγέθους που προσεγγίζουν τα φυσιολογικά πρώιμα αιμοποιητικά κύτταρα, και καθώς εκφράζουν αντιγόνα CD45 και CD34 σε...
  • Página 64 ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Διασφαλίστε ότι η περιοχή H έχει σχεδιαστεί ως AMORPHOUS (Άμορφη) περιοχή. 8. Ιστόγραμμα 6 – Αντιγράψτε την περιοχή D από το Ιστόγραμμα 4 ως περιοχή F στο Ιστόγραμμα 6. 9. Ιστόγραμμα 7 – Δημιουργήστε μια άμορφη περιοχή G στο Ιστόγραμμα 7 για να συμπεριλάβετε μόνο τα μονά Stem-Count ή...
  • Página 65 1. Στην οθόνη Acquisition Run (Εκτέλεση λήψης), επιλέξτε Setup Screen >> Protocol (Πρωτόκολλο οθόνης ρυθμίσεων). 2. Επιλέξτε Statistics (Στατιστικά στοιχεία) >> CAL FACTOR (Συντελεστής βαθμονόμησης). 3. Εισαγάγετε τον αριθμό του συντελεστή CAL (προσδιορισμένη συγκέντρωση) που αναγράφεται στο φιαλίδιο των Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres. 4.
  • Página 66 ΕΜΠΟΡΙΚΑ ΣΗΜΑΤΑ Η επωνυμία Beckman Coulter, το τυποποιημένο λογότυπο και τα σήματα προϊόντων και υπηρεσιών της Beckman Coulter που αναφέρονται στο παρόν είναι εμπορικά σήματα ή σήματα κατατεθέντα της Beckman Coulter, Inc. στις Ηνωμένες Πολιτείες και σε άλλες χώρες. ΠΡΟΣΘΕΤΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ...
  • Página 67 Stem-Trol kontrollsejtek IM3632 In vitro diagnosztikai használatra RENDELTETÉSSZERŰ HASZNÁLAT A Stem-Trol Control Cells egy ellenőrzött, áramlási citometriával és CD45 és/vagy CD34 monoklonális antitest reagenssel végzett immunofenotipizálási vizsgálat minőség-ellenőrzésére szolgáló termék. Pozitív sejtkontrollként szolgálnak, amelyeket ugyanúgy kell feldolgozni, mint a Stem-Trol Control Cells sejtek hozzáadásával kezelt perifériás teljesvér-mintákat.
  • Página 68 10.A Stem-Trol Control Cells mindegyik tétele egy bizonyos koncentrációban tartalmazza a sejteket. Ellenőrizze, hogy a helyes vizsgálati koncentrációt használja-e az abszolút számok meghatározása során. 11. A megadottól eltérő inkubálási vagy keverési idők és hőmérsékletek alkalmazása hibás eredményeket adhat. 12.Hibás eredményt kaphat, ha az áramlási citométer iránybeállítása vagy standardizálása nem megfelelő, vagy ha a sejtpopulációk kapuzása nem megfelelően történik.
  • Página 69 ELJÁRÁS Az automatikus elemzésre vonatkozó részletes utasításokat lásd a stemCXP rendszerszoftverhez mellékelt stemCXP System Guide (stemCXP rendszer útmutató) dokumentumban. A kézi vizsgálattal kapcsolatban olvassa el a Stem-Kit Reagents termékkel együtt csomagolt tájékoztatót, és kövesse a következő eljárást. MEGJEGYZÉS: A vizsgálat standardizálása érdekében, új Stem-Kit Reagents érkezése esetén és utána naponta futtasson eljárás-ellenőrzést Stem-Trol Control Cells megfestésével egy egészséges donor perifériás vérmintájával.
  • Página 70 FONTOS: Hibás eredmények veszélye áll fenn, ha a minta vizsgálata a Stem-Count vagy Flow-Count Fluorospheres gömbök hozzáadása után több mint 1 órával történik. Az elkészített minták vizsgálatát el kell végezni a Stem-Count vagy Flow-Count Fluorospheres gömbök hozzáadása után 1 órán belül. Az előkészítés összefoglalása (mintacső...
  • Página 71 Területek létrehozása Hozzon létre területeket a következők szerint: 1. 1. hisztogram – Hozza létre az egyenes vonalakkal határolt A területet, amely tartalmazza az összes CD45 fehérvérsejtet, és nem tartalmazza a trombocitákat, a vörösvértest-törmelékeket és az aggregátumokat. 2. 1. hisztogram – Hozzon létre egy AMORPHOUS (amorf) E területet, amely a limfocitákat [erős CD45 festődés, alacsony Side scatter (oldalra szóródás)] tartalmazza.
  • Página 72 Ellenőrizze, hogy a színkompenzáció be van-e állítva a szokásos működéshez. További utasítások a készülék kézikönyvében találhatók. 2. 5 másodpercig vortexelje a kémcsöveket. 3. Végezzen adatmérést az áramlási citométerrel. Legalább 75 000 CD45 eseményt kell vizsgálni. 4. Állítsa be a diszkriminátort és a területeket a TROL 45/34/7-AAD mintacső vizsgálata útján. Példavizsgálat A FÜGGELÉKBEN látható...

  • Página 73: További Információk

    Ellenőrizze, hogyan történt a területhatárok meghatározása. Szükség esetén ismételje meg az előkészítést új kémcsövek használatával. Végezze el az adatgyűjtést és az elemzést az új és az előző mintacsősorozat esetében. Hasonlítsa össze az eredményeket. Ha az eredmények nem egyeznek, vegye fel a kapcsolatot a Beckman Coulter helyi képviselőjével. VÉDJEGYEK A Beckman Coulter, a stilizált logó, valamint az itt említett Beckman Coulter termék- és szolgáltatásjegyek a...
  • Página 74 Stem-Trol komórki kontrolne IM3632 Do in vitro użycia diagnostycznego ZASTOSOWANIE Komórki kontrolne Stem-Trol Control Cells to oznaczany produkt kontroli jakości do analizy immunofenotypowania przy użyciu odczynników przeciwciał monoklonalnych CD45 i (lub) CD34 i cytometrii przepływowej. Zapewnia to dodatnią kontrolę komórkową, która jest przetwarzana w taki sam sposób jak próbka krwi, gdy komórki kontrolne Stem-Trol Control Cells są...
  • Página 75 8. Użyć skalibrowanej pipety z dodatnim wypieraniem lub pipety powtarzalnej do dozowania próbek i próbek kontrolnych Stem-Trol Control Cells. W przeciwnym razie uzyskane wyniki mogą być błędne. 9. Stosować techniki pipetowania zalecane przez producenta pipety, aby zapewnić dokładne i precyzyjne pipetowanie próbki i komórek kontrolnych Stem-Trol Control Cells.
  • Página 76 • Kalibrowana pipeta z dodatnim wypieraniem (20 µL, 100 µL, 2 mL) i końcówki lub kalibrowana pipeta powtarzalna (20 µL, 100 µL, 2 mL) oraz końcówki. • Kalibrowane pipety standardowe (20 µL, 100 µL, 2 mL) i końcówki. • Mikser Vortex. •...
  • Página 77 Jeżeli podczas pipetowania występują pęcherzyki powietrza, istnieje ryzyko uzyskania WAŻNE: błędnych wyników. Nadmierne mieszanie fluorokulek Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres może spowodować powstanie pęcherzyków powietrza. Nie należy nadmiernie mieszać fluorokulek Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres i nie należy pipetować pęcherzyków powietrza do probówek z próbkami. 9.
  • Página 78 4. Tworzenie Histogramu 4 jako rozpraszanie do przodu wobec rozpraszania bocznego. 5. Tworzenie Histogramu 5 jako FL1 CD45-FITC wobec FL2 CD34-PE. 6. Tworzenie Histogramu 6 jako rozpraszanie do przodu wobec rozpraszania bocznego. 7. Tworzenie histogramu 7 jako czasu wobec fluorokulek FL3 Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres. 8.
  • Página 79 4. Histogram 4 — Przypisanie „A” i „B” i „C” (ABC) do Histogramu 4, aby wyświetlić wszystkie zgrupowane zdarzenia CD45 CD34 z rozpraszaniem bocznym niskim do średniego i niską ekspresją barwienia CD45. Zdarzenia z regionu ABCD są rzeczywistymi CD34 HPC. 5.

  • Página 80: Znaki Towarowe

    Porównać dwa wyniki. Jeżeli nie ma zgodności, skontaktować się z przedstawicielem firmy Beckman Coulter. ZNAKI TOWAROWE Beckman Coulter, stylizowane logo oraz wymienione tu znaki produktów i usług firmy Beckman Coulter są znakami towarowymi lub zastrzeżonymi znakami towarowymi firmy Beckman Coulter, Inc. w Stanach Zjednoczonych i innych krajach.
  • Página 81 Legenda symboli Słowniczek symboli jest dostępny pod adresem beckman.com/techdocs (numer dokumentu B60062) B60231–AE 81 of 128...

  • Página 82: Určené Použití

    Stem-Trol Kontrolní buňky IM3632 Pro použití při diagnostice in vitro URČENÉ POUŽITÍ Stem-Trol Control Cells je produkt pro stanovenou kontrolu kvality. Slouží k imunofenotypizační analýze s použitím reagencií monoklonálních protilátek CD45 a případně CD34 a průtokové cytometrie. Umožňuje provádění kontroly pozitivních buněk, která...
  • Página 83 9. Aby bylo zajištěno přesné a precizní pipetování vzorků a buněk Stem-Trol Control Cells, používejte pipetovací techniky doporučené výrobcem pipety, jinak mohou být výsledky chybné. 10.Každá šarže buněk Stem-Trol Control Cells má specifickou koncentraci buněk. Při stanovení výsledků absolutního počtu se ujistěte, že byla použita správná hodnota stanovené koncentrace. 11.
  • Página 84 POSTUP Úplné pokyny k automatické analýze jsou uvedeny v příručce stemCXP System Guide (Pokyny k systému stemCXP), dodávané se systémovým softwarem stemCXP. Při ruční analýze postupujte podle příbalového letáku k balíku Stem-Kit Reagents a dodržujte následující postup. Kvůli standardizaci analýzy při obdržení nové soupravy Stem-Kit Reagents a poté jednou POZNÁMKA: denně...
  • Página 85 Souhrny preparátu (štítek zkumavky: TROL45/34/7-AAD) Reagencie a vzorky Objem CD45-FITC / CD34-PE 20 µl 7-AAD Viability Dye 20 µl Plná krev 100 µl Stem-Trol Control Cells 20 µl Promíchejte – provádějte inkubaci při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Chraňte před světlem.
  • Página 86 3. Histogram 2 – vytvořte přímočarou oblast B v histogramu 2, která bude obsahovat všechny události CD34 s nízkým až středním kolmým rozptylem. V histogramu 2 nastavte hodnotu zastavení počtu 75 000 událostí (události CD45 4. Histogram 3 – vytvořte amorfní oblast C v histogramu 3, která zahrnuje všechny shromážděné události CD45 5.
  • Página 87 Výpočet počtu buněk Stem-Trol Control Cells CD34 Použití výsledků průtokové cytometrie upravených automaticky s použitím stanovené koncentrace přípravku Stem-Count nebo Flow-Count Fluorospheres získané použitím softwaru System II (verze 3.0) a průtokového cytometru COULTER EPICS XL/XLMCL. Aby bylo možné automaticky zjišťovat absolutní počet na průtokových cytometrech COULTER EPICS XL / XL-MCL, musí...

  • Página 88: Ochranné Známky

    Beckman Coulter. OCHRANNÉ ZNÁMKY Beckman Coulter, stylizované logo a známky produktů a služeb společnosti Beckman Coulter uvedené v tomto dokumentu jsou ochranné známky nebo registrované ochranné známky společnosti Beckman Coulter, Inc., ve Spojených státech amerických a dalších zemích.

  • Página 89: Kullanim Amaci

    Stem-Trol Kontrol Hücreleri IM3632 İn Vitro Diagnostik Kullanım için KULLANIM AMACI Stem-Trol Control Cells, CD45 ve/veya CD34 monoklonal antikorları, reaktifler ve akış sitometrisi kullanılarak immünofenotipleme analizi yapmaya yönelik test edilmiş bir kalite kontrol ürünüdür. Stem-Trol Control Cells bir periferik tam kan örneğine eklendiğinde bir kan numunesiyle aynı şekilde işlenen pozitif bir hücre kontrolü sağlar.
  • Página 90 10.Her Stem-Trol Control Cells lotunda belirli bir hücre konsantrasyonu vardır. Mutlak sayım sonuçlarını tayin ederken test edilen doğru konsantrasyon değerinin kullanıldığından emin olun. 11. 6.8 Belirtilenler dışındaki inkübasyon veya karıştırma süresi ve sıcaklıkları hatalı sonuçlar verebilir. 12.6.10 Akış sitometresi doğru şekilde hizalanmamış, floresans için standardize edilmemiş ya da hücre popülasyonları...
  • Página 91 PROSEDÜR Otomatik analiz ile ilgili talimatların tamamı için stemCXP Sistem Yazılımı ile birlikte verilen stemCXP System Guide’a (stemCXP Sistem Kılavuzu) bakın. Manuel analiz için Stem-Kit Reagents prospektüsüne ve aşağıdaki prosedüre bakın. NOT: Analizi standart hale getirmek için yeni Stem-Kit Reagents alırken ve sonrasında günlük aralıklarla, sağlıklı...
  • Página 92 Hazırlama Özeti (Tüp Etiketi: TROL45/34/7-AAD) Hacim Reaktifler ve Örnekler CD45-FITC / CD34-PE 20 µL 7-AAD Viyabilite Boyası 20 µL Tam Kan 100 µL Stem-Trol Control Cells 20 µL Vorteks – 20 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. Işıktan koruyun 1X NH Cl Lysing Solution 2 mL Vorteks –...
  • Página 93 3. Histogram 2 – Histogram 2 üzerinde düşük ila ara Yan Saçılmaya sahip tüm CD34 olaylarını içeren doğrusal bir B Bölgesi oluşturun. Histogram 2’de 75.000 olaylık (CD45 olayları) bir durdurma sayısı ayarlayın. 4. Histogram 3 – Histogram 3 üzerinde kümelenmiş tüm CD45 olaylarını...
  • Página 94 Stem-Count veya Flow-Count Fluorospheres singletleri G Bölgesinin Adı olarak “CAL” yazın ve SET-UP SCREEN PROTOCOL (Kurulum Ekranı Protokolü) menüsünün STATISTICS (İstatistik) iletişim kutusundaki CAL FACTOR (Kalibrasyon Faktörü) kutusuna 1000 gibi bir değer girin. Stem-Count veya Flow-Count Fluorospheres için CAL Faktörü Girme: 1.
  • Página 95 Akış sitometresi raporlarını ve test tüplerinizdeki boyama ve parçalama işleminin kalitesini görsel olarak kontrol edin. Bölge sınırlarının ayarlanma yöntemini doğrulayın. Gerekirse, preparatı yeni test tüpleriyle tekrarlayın. Hem yeni hem de önceki tüp serilerini edinin ve analiz edin. İki sonucu karşılaştırın. Uyuşmazlık varsa yerel Beckman Coulter Temsilcinizi arayın.
  • Página 96 Контрольные клетки Stem-Trol IM3632 Применять только для диагностики in vitro НАЗНАЧЕНИЕ Контрольные клетки Stem-Trol Control Cells — аналитический продукт для контроля качества для анализа иммунофенотипирования с использованием реагентов мионоклональных антител CD45 и / или CD34 и проточной цитометрии. Он предоставляет положительный клеточный контроль, который обрабатывается...
  • Página 97 7. Контрольные клетки Stem-Trol Control Cells осаждаются при длительном хранении. Перед использованием убедитесь, что клетки полностью возвращены в состояние суспензии. Избегайте избыточного перемешивания, чтобы свести к минимуму образование пузырьков воздуха. Во избежание получения ошибочных результатов не пипетируйте пузырьки воздуха. 8. Используйте калиброванную пипетку прямого вытеснения или репитер-пипетку для дозирования проб и...
  • Página 98 • Stem-Kit Reagents (REF IM3630), в том числе краситель жизнеспособности 7-AAD. • Альтернатива Stem-Count Fluorospheres: Flow-Count Fluorospheres (REF. 7547053) • Ледяная ванна. • Пластиковые пробирки (12 x 75 мм). • Калиброванная пипетка прямого вытеснения (20 мкл, 100 мкл, 2 мл) и наконечники или калиброванная репитер-пипетка...
  • Página 99 7. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 10 мин, в защищенном от света месте. 8. Храните пробирки в штативе на льду (2–8°C), защищая от света. ВАЖНО: Риск ошибочных результатов в случае пипетирования пузырьков воздуха. Излишнее перемешивание Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres может привести...
  • Página 100 Построение гистограмм Создайте гистограммы следующим образом: 1. Создайте гистограмму 1 как FL1 CD45-FITC относительно бокового рассеяния. 2. Создайте гистограмму 2 как FL2 CD34-PE относительно бокового рассеяния. 3. Создайте гистограмму 3 как FL1 CD45-FITC относительно бокового рассеяния. 4. Создайте гистограмму 4 как прямое рассеяние относительно бокового рассеяния. 5.
  • Página 101 1. Гистограмма 1 — выполните назначение «H» гистограмме 1 для отображения всех событий, за исключением всех Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres. См. руководство по инструменту для создания «not gates. » 2. Гистограмма 2 — выполните назначение «A» гистограмме 2 для отображения всех событий CD45 3.
  • Página 102 Таблица (ниже): Пример статистики, полученный с пробиркой TROL 45/34/7-AAD на программном обеспечении System II, с использованием функции CAL FACTOR (Коэффициент калибровки), где: • 1024 — аналитическая концентрация Stem-Count Fluorospheres. • 5248 — общее количество флуоросфер, накопленных в регионе CAL (Калибровка) в течение всего времени...

  • Página 103: Товарные Знаки

    и проанализируйте как новую, так и предыдущую серию пробирок. Сравните два результата. Если отсутствует соответствие, обратитесь в местное представительство компании Beckman Coulter. ТОВАРНЫЕ ЗНАКИ Beckman Coulter, стилизованный логотип и упоминаемые здесь знаки продукции и услуг Beckman Coulter являются товарными знаками или зарегистрированными товарными знаками корпорации Beckman Coulter в Соединенных Штатах и других странах.

  • Página 104: Celule De Control Stem-Trol

    Celule de control Stem-Trol IM3632 Pentru utilizare în diagnosticarea in vitro UTILIZARE PREVĂZUTĂ Stem-Trol Control Cells este un produs de control al calității testului pentru analize de imunofenotipare folosind anticorpii monoclonali CD45 și/sau CD34 și citometria de flux. El oferă un control al celulelor pozitive care este procesat în aceeași manieră...
  • Página 105 10. Fiecare lot de Stem-Trol Control Cells are o concentrație specifică de celule. Asigurați-vă că utilizați concentrația de test corectă atunci când determinați rezultatele valorilor absolute. 11. Timpii sau temperaturile de incubare sau mixare altele decât cele specificate pot genera rezultate eronate. 12.
  • Página 106 PROCEDURĂ Pentru analize automate, consultați documentul stemCXP System Guide (Ghidul de utilizare a sistemului stemCXP) furnizat împreună cu software-ul stemCXP System pentru instrucțiuni complete. Pentru analize manuale, consultați prospectul produsului Stem-Kit Reagents și procedura următoare. OBSERVAŢIE: Pentru a standardiza analiza, atunci când primiți Stem-Kit Reagents noi și apoi la intervale zilnice executați o verificare a procesului colorând Stem-Trol Control Cells cu o probă...
  • Página 107 Sumarul preparării (etichetă eprubetă: TROL45/34/7-AAD) Reactivi și probe Volum 20 µl CD45-FITC / CD34-PE Colorant viabilitate 7-AAD 20 µl Sânge integral 100 µl Stem-Trol Control Cells 20 µl Vortex – Incubați la temperatura camerei timp de 20 minute. A se feri de lumină 1X NH Cl Lysing Solution 2 ml...
  • Página 108 3. Histograma 2 – Creați o regiune B rectiliniară pe Histograma 2 pentru a include toate evenimentele CD34 dispersie perpendiculară de la scăzută la intermediară. Setați un contor de oprire pentru 75.000 de evenimente (evenimente CD45 ) în Histograma 2. 4.
  • Página 109 Introduceți „CAL” drept nume pentru Regiunea G de valori unice pentru Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres și introduceți valoarea (de exemplu, 1000) în caseta CAL FACTOR (Factor cal.) din ecranul de dialog STATISTICS (Statistici) al meniului SET-UP SCREEN PROTOCOL (Configurare ecran protocol). Introducerea CAL Factor (Factor CAL) pentru Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres: 1.
  • Página 110 Beckman Coulter. MĂRCI COMERCIALE Beckman Coulter, logoul stilizat și mărcile de produse și servicii Beckman Coulter menționate aici sunt mărci comerciale sau mărci comerciale înregistrate ale Beckman Coulter, Inc. în Statele Unite și în alte țări. INFORMAȚII SUPLIMENTARE www.beckmancoulter.com...
  • Página 111 Stem-Trol kontroles šūnas IM3632 In vitro diagnostikas lietošanai PAREDZĒTĀ LIETOŠANA Stem-Trol kontroles šūnas ir pārbaudīts kvalitātes kontroles produkts imūnofenotipēšanas analīzei, izmantojot CD45 un/vai CD34 monoklonālo antivielu reaģentus un plūsmas citometriju. Tas nodrošina pozitīvu šūnu kontroli, kas tiek apstrādāta tādā pašā veidā kā asins paraugs, kad Stem-Trol kontroles šūnas tiek ievietotas perifērās pilnasins paraugā. Tas ļauj verificēt reaģenta veiktspēju un metodes, ko izmanto, lai iekrāsotu mērķa šūnas (t.
  • Página 112 11. Inkubācijas un sajaukšanas laiks, kas atšķiras no norādītajām specifikācijām, var radīt kļūdainus rezultātus. 12. Kļūdaini rezultāti var rasties, ja plūsma citometrs nav pareizi izlīdzināts vai standartizēts fluorescencei vai, ja šūnu populācijas ir slēgtas nepareizi. 13. Rezultāti, kas noteikti, izmantojot plūsmas citometrus, līzes sistēmas vai antivielas, kuras atšķiras no tām, ko izmanto paredzamo rezultātu noteikšanā, var neiekļauties paredzamajā...
  • Página 113 Lai standartizētu analīzi, saņemot jaunus Stem-Kit reaģentus un katru dienu pēc tam veicot PIEZĪME. procesa pārbaudi, iekrāsojiet Stem-Trol kontroles šūnas ar normālu perifēro asins paraugu no veselīga donora. Tā kā Stem-Trol kontroles šūnas ir stabilizētas šūnas (t. i., dzīvotnespējīgas šūnas), 7-AAD dzīvotspējas krāsvielu var vizuāli pārbaudīt ar Stem-Trol kontroles šūnām (skatiet sadaļu Histogrammas izveide).
  • Página 114 Reaģenti un paraugi Tilpums 1X NH Cl Lysing Solution 2 ml Jāveic virpuļveida maisīšana — 10 minūtes jāinkubē istabas temperatūrā. Sargājiet no gaismas Stem-Count Fluorospheres 100 µl MANUĀLĀ ATSIJĀŠANAS UN ANALĪZES METODE Protokola iestatīšana Plūsmas citometram ir jābūt aprīkotam tā, lai noteiktu uz priekšu vērsto izkliedi, sānu izkliedi un četrus fluorescences kanālus.
  • Página 115 H reģions ir jāzīmē kā AMORFS reģions. PIEZĪME. 8. 6. histogramma — kopējiet apgabalu D no 4. histogrammas uz 6. histogrammu kā apgabalu F. 9. 7. histogramma — 7. histogrammā izveidojiet taisnvirziena apgabalu G, iekļaujot tikai Stem-Count vai Flow-Count fluorosfēru singletus. Apgabalu G var marķēt kā „CAL”, lai varētu automātiski aprēķināt CD34 HPC absolūtos skaitļus (sīkāku informāciju skatiet ierīces lietošanas rokasgrāmatā).
  • Página 116 Salīdziniet abus rezultātus. Ja tie nesakrīt, sazinieties ar vietējo Beckman Coulter pārstāvi. PREČU ZĪMES Beckman Coulter, stilizētais logotips un Beckman Coulter preču un pakalpojumu zīmes, kas minētas šeit, ir Beckman Coulter, Inc. reģistrētas preču zīmes vai preču zīmes Amerikas Savienotajās Valstīs un citās valstīs.
  • Página 117 PAPILDINFORMĀCIJA www.beckmancoulter.com Simbolu skaidrojumi Simbolu vārdnīca ir pieejama vietnē beckman.com/techdocs (dokumenta numurss B60062) B60231–AE 117 of 128...
  • Página 118 Stem-Trol Control Cells IM3632 Para uso em diagnóstico in vitro USO PREVISTO As células de controle Stem-Trol são um produto de controle de qualidade testado para a análise de imunofenotipagem utilizando reagentes de anticorpos monoclonais CD45 e/ou CD34 e citometria de fluxo. Ele fornece um controle de células positivo que é...
  • Página 119 9. Utilize as técnicas de pipetagem recomendadas pelo fabricante da pipeta para garantir a pipetagem exata e precisa das amostras e células de controle Stem-Trol; caso contrário podem ocorrer resultados errados. 10.Cada lote de células de controle Stem-Trol tem uma concentração específica de células. Certifique-se de usar a concentração testada correta para determinar os resultados de contagem absoluta.
  • Página 120 • Software do sistema stemCXP, SOMENTE para análise automatizada de células de controle Stem-Trol nos citômetros de fluxo FC 500 equipados com o software CXP. PROCEDIMENTO Para a análise automática, consulte o stemCXP System Guide (Guia do sistema stemCXP) fornecido com o software do sistema stemCXP para obter instruções completas.
  • Página 121 IMPORTANTE: Há risco de resultados errados se a amostra for analisada mais de 1 hora após a adição de fluoroesferas Stem-Count ou Flow-Count. As amostras preparadas devem ser analisadas até 1 hora após a adição de fluoroesferas Stem-Count ou Flow-Count. Resumo da preparação (rótulo do tubo: TROL45/34/7-AAD) Reagentes e amostras Volume...
  • Página 122 Criação de regiões Crie regiões da seguinte forma: 1. Histograma 1 — Crie uma Região A retilínea para incluir todos os leucócitos CD45 e eliminar plaquetas, detritos de hemácias e agregados. 2. Histograma 1 — Crie uma Região E amorfa nos linfócitos (CD45 brilhante, dispersão lateral baixa). 3.
  • Página 123 Exemplo de análise Os histogramas apresentados no ANEXO são exibidos em uma ordem crescente de números conforme demonstrado no protocolo. Cálculo das células de controle Stem-Trol CD34 Usando resultados de citometria de fluxo ajustados automaticamente com a concentração testada de fluoroesferas Stem-Count ou Flow-Count obtida usando o software do System II (Versão 3.0) e um citômetro de fluxo COULTER EPICS XL/XLMCL.
  • Página 124 Se eles não estiverem de acordo, ligue para o representante local da Beckman Coulter. MARCAS COMERCIAIS Beckman Coulter, o logotipo estilizado e as marcas dos produtos e serviços da Beckman Coulter contidos neste documento são marcas comerciais ou marcas comerciais registradas da Beckman Coulter, Inc. nos Estados Unidos e em outros países.
  • Página 125 APPENDIX - EXAMPLES The following eight histograms correspond to the analysis of the Stem-Trol Control Cells stained with Stem-Kit Reagents. Below are histograms obtained on a COULTER EPICS XL/XL-MCL flow cytometer equipped with System II Software (Version 3.0). Histogram 1: displays all events minus all Stem-Count Fluorospheres (i.e. “-H” see Histogram 5). Notes: Position Region A to include all CD45 events (leukocytes) while excluding CD45- debris.
  • Página 126 Amorphous Region H is drawn to include all Stem-Count Fluorospheres. Region H should be located at the top right corner of the Histogram including the last channel of the FL1 Log (on the right) and FL2 Log scales (on the top).
  • Página 127 REFERENCES National Committee for Clinical Laboratory Standards. Clinical Applications of Flow Cytometry: Quality Assurance and Immunophenotyping of Lymphocytes; Approved Guideline, NCCLS Document H42-A, [ISBN 1-56238-364-7]. Vol. 18, N° 21. January 1999 Edition. Roth, P., Maples, J., Hall, J., Dailey, T.,“Use of control cells to standardize enumeration of CD34+ stem cells”, 1996, Ann. NY Acad. Sci., 770, 370-372.
  • Página 128 ООО «Бекмен Культер», 109004 Москва, Россия, ул. Станиславского, д. 21, стр. 3. Тел. +7 (495) 228 67 00, e-mail: beckman.ru@beckman.com Beckman Coulter do Brasil Com. e Imp. de Prod. de Lab. Ltda Alameda Rio Negro, 500, 15 andar, Torre B Alphaville Industrial CEP 06.454-00 Barueri, São Paulo, Brasil...

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