Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 115

PIEZĪME.
8. 6. histogramma — kopējiet apgabalu D no 4. histogrammas uz 6. histogrammu kā apgabalu F.
9. 7. histogramma — 7. histogrammā izveidojiet taisnvirziena apgabalu G, iekļaujot tikai Stem-Count vai Flow-Count
fluorosfēru singletus. Apgabalu G var marķēt kā „CAL", lai varētu automātiski aprēķināt CD34
(sīkāku informāciju skatiet ierīces lietošanas rokasgrāmatā).
10. 8. histogramma — 8. histogrammā izveidojiet taisnvirziena apgabalu J, lai atdalītu dzīvotspējīgus leikocītus (7-AAD
negatīvus notikumus) no dzīvotnespējīgiem notikumiem (galvenokārt Stem-Trol kontroles šūnām, kas ir pozitīvas
attiecībā uz 7-AAD iekrāsošanu).
Atsijāšanas faktoru izveide
Atsijāšanas faktori ir jāizveido tālāk aprakstītajā veidā.
1. 1. histogramma — piešķiriet 1. histogrammai „H", lai rādītu visus notikumus, izņemot visas Stem-Count un
Flow-Count fluorosfēras. Skatiet instrumenta rokasgrāmatu, lai izveidotu „NOT atsijāšanas faktorus".
2. 2. histogramma — piešķiriet 2. histogrammai apgabalu A, lai rādītu visus CD45
3. 3. histogramma — piešķiriet 3. histogrammai „A" un „B" (AB), lai parādītu visus CD45
4. 4. histogramma — piešķiriet 4. histogrammai apgabalu A, B un C (ABC), lai rādītu visus CD45
notikumus ar zemu līdz vidēju sānu izkliedi un zemu CD45 krāsošanas ekspresiju. Notikumi apgabalā ABCD ir patiesi
dzīvotspējīgi CD34
5. 5. histogramma — neatsijāta, lai rādītu visus notikumus.
6. 6. histogramma — piešķiriet „E", lai parādītu limfocītus kā vizuālu diskriminatora pārbaudītāju.
7. 7. histogramma — piešķiriet 7. histogrammai „H", lai rādītu visas Stem-Count vai Flow-Count fluorosfēras, tostarp
dubletus.
8. 8. histogramma — piešķiriet 8. histogrammai apgabalu A, lai rādītu CD45
Plūsmas citometra iestatīšana
1. Nodrošiniet, ka plūsmas citometrs ir pareizi izlīdzināts un standartizēts gaismas izkliedei un fluorescences
intensitātei atbilstoši ražotāja un laboratorijas pamatnostādnēm. Pārbaudiet, vai standarta darbībai ir iestatīta
krāsu kompensācija. Papildu norādījumus skatiet instrumenta rokasgrāmatā.
2. Testa mēģenēm 5 sekundes ir jāveic virpuļveida maisīšana.
3. Veiciet datu iegūšanu plūsmas citometrā. Jāanalizē vismaz 75 000 CD45
4. Pielāgojiet diskriminatoru un apgabalus, analizējot TROL 45/34/7-AAD stobriņu.
Analīzes piemērs
PIELIKUMĀ norādītās histogrammas tiek rādītas augošā secībā, kā parādīts protokolā.
CD34 Stem-Trol kontroles šūnu aprēķins
+
Tiek izmantoti plūsmas citometrijas rezultāti, kas automātiski noregulēti ar Stem-Count skaita vai Flow-Count fluorosfēru
testēto koncentrāciju, kura iegūta, izmantojot System II programmatūru (versiju 3.0) un COULTER EPICS XL/XLMCL plūsmas
citometru.
Lai COULTER EPICS XL/XL-MCL plūsmas citometros iegūtu automātiski noteiktus absolūtos skaitus, pirms parauga iegūšanas
jāievada pareizā Stem-Count vai Flow-Count fluorosfēru testētā koncentrācija.
Ievadiet „CAL" kā Stem-Count vai Flow-Count fluorosfēru singletu apgabala G nosaukumu un pēc tam izvēlnes SET-UP
SCREEN PROTOCOL (Iestatīšanas ekrāna protokols) dialogekrāna STATISTICS (Statistika) lodziņā CAL FACTOR (CAL
koeficients) ievadiet vērtību, piemēram, 1000.
CAL koeficienta ievadīšana Stem-Count vai Flow-Count fluorosfērām
1. Ekrānā „Acquisition Run" (Iegūšanas izpilde) atlasiet „Setup Screen" (Iestatīšanas ekrāns) >> „Protocol" (Protokols).
2. Izvēlieties Statistika >> CAL FACTOR.
3. Ievadiet CAL koeficienta skaitli (testēto koncentrāciju) no Stem-Count vai Flow-Count fluorosfēru flakona.
4. Nospiediet ENTER.
5. Izvēlieties OKAY.
6. Parādītajā uzvednē ierakstiet „Y", lai apstiprinātu.
B60231–AE
H reģions ir jāzīmē kā AMORFS reģions.
HPC notikumi.
+
+
115 of 128
HPC absolūtos skaitļus
+
notikumus.
+
un CD34
+ +
CD34
+
notikumus.
+
notikumi.
notikumus.
klasterizētos
+