Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 69

ELJÁRÁS
Az automatikus elemzésre vonatkozó részletes utasításokat lásd a stemCXP rendszerszoftverhez mellékelt
stemCXP System Guide (stemCXP rendszer útmutató) dokumentumban.
A kézi vizsgálattal kapcsolatban olvassa el a Stem-Kit Reagents termékkel együtt csomagolt tájékoztatót, és
kövesse a következő eljárást.
MEGJEGYZÉS: A vizsgálat standardizálása érdekében, új Stem-Kit Reagents érkezése esetén és
utána naponta futtasson eljárás-ellenőrzést Stem-Trol Control Cells megfestésével egy
egészséges donor perifériás vérmintájával. Továbbá, mivel a Stem-Trol Control Cells
oldat stabilizált (tehát nem élő) sejteket tartalmaz, megtekintéssel ellenőrizhető a 7-AAD
vitális festékkel való festődést a Stem-Trol Control Cells sejteknél (lásd a Hisztogram
létrehozása fejezetben).
Biztosítsa, hogy az áramlási citométer megfelelően, a gyártó és a laboratórium irányelvei alapján
legyen megfelelő irányba beállítva és standardizálva a fluoreszcencia-intenzitáshoz.
fluoreszcencia-kompenzációs beállítások megfelelően, a gyártó és a laboratórium irányelvei alapján legyenek
beállítva.
Állítsa be a kontrollreagensek és az antitestek hőmérsékletét szobahőmérsékletre.
Minden kísérlethez címkézzen fel egy mintacsövet a „TROL 45/34/7-AAD" jelzéssel.
1. Pipettázzon 20 µL CD45-FITC / CD34-PE oldatot a kémcsőbe.
2. Pipettázzon 20 µL 7-AAD vitális festéket a kémcsőbe.
FONTOS:
3. A cső aljába pipettázzon pontosan 100 µL jól elkevert normális teljesvér-mintát kalibrált, pozitív kiszorításos
vagy ismétlő pipetta használatával.
4. A Stem-Trol oldat előkészítése és hozzáadása:
• 5 másodpercig vortexelje a Stem-Trol Control Cells oldatot.
• Pipettázzon pontosan 20 µL Stem-Trol Control Cells oldatot a kémcsőbe.
• 5 másodpercig vortexelje a mintacsöveket.
5. Inkubálja szobahőmérsékleten (18–25 °C), fénytől védve, 20 percig.
6. Adjon 2 mL elkészített 1X NH
A lizálóoldat elkészítésének részleteit olvassa el a Stem-Kit Reagents termékkel együtt csomagolt
tájékoztatóban.
7. Inkubálja 10 percig szobahőmérsékleten, fénytől védve.
8. A csöveket tárolja jégre helyezett tartóba (2–8 °C), fénytől védve.
FONTOS:
9. A Stem-Count vagy Flow-Count Fluorospheres gömbök elkeverése céljából forgassa át az üveget
3–5 alkalommal. A buborékképződés minimalizálása érdekében kerülje a túlzott keverést.
10.Az adatgyűjtés előtt pipettázzon 100 µL Stem-Count vagy Flow-Count Fluorospheres oldatot a kémcsőbe.
11. A hozzáadás után azonnal vortexelje 5 másodpercig. Tárolja 2–8 °C-on. Ismét végezzen vortexelést
közvetlenül az áramlási citometriás mérés előtt.
B60231–AE
A nem teljes lízis veszélye áll fenn, ha vérminta marad a kémcső tetején vagy oldalán.
Legyen körültekintő pipettázáskor, hogy a vérminta ne érintse a kémcső tetejét vagy
oldalát. Szükség esetén, a kémcső tetején vagy oldalán maradt vérminta eltávolítása
céljából tisztítsa meg a kémcsövet vattapálcával.
Cl Lysing Solution oldatot a kémcsőbe, és azonnal vortexelje 5 másodpercig.
4
Ha légbuborékokat juttat be a pipettával, hibás eredmények veszélye áll fenn.
A Stem-Count vagy Flow-Count Fluorospheres oldat túlzott mértékű keverése
légbuborékok képződését okozhatja. A Stem-Count vagy Flow-Count Fluorospheres
oldatot ne keverje túlzott mértékben, és ne juttasson be légbuborékokat pipettával
a mintacsőbe.
69 of 128
Biztosítsa, hogy a