Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 78

4. Tworzenie Histogramu 4 jako rozpraszanie do przodu wobec rozpraszania bocznego.
5. Tworzenie Histogramu 5 jako FL1 CD45-FITC wobec FL2 CD34-PE.
6. Tworzenie Histogramu 6 jako rozpraszanie do przodu wobec rozpraszania bocznego.
7. Tworzenie histogramu 7 jako czasu wobec fluorokulek FL3 Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres.
8. Tworzenie Histogramu 8 jako FL4 7-AAD wobec rozpraszania bocznego.
Histogramy od 1 do 4 są przeznaczone do charakteryzowania CD34
Te pierwsze cztery histogramy są skonfigurowane zgodnie z wytycznymi ISHAGE dotyczącymi oznaczania
komórek CD34 metodą cytometrii przepływowej (2,3).
+
Histogramy od 5 do 7 są przeznaczone do monitorowania parametrów, które są ważne podczas etapu akwizycji.
Obejmują one dyskryminator rozpraszania do przodu, liczbę zdarzeń CD45
singletów fluorokulki.
Histogram 8 jest przeznaczony do odróżniania i analizowania zdarzeń żywotnych od nieżywotnych, gdy jest to
wymagane.
Tworzenie obszarów
Stwórz następujące obszary:
1. Histogram 1 — Utworzyć prostoliniowy Region A, aby objąć wszystkie leukocyty CD45
krwi, pozostałości krwinek czerwonych i agregaty.
2. Histogram 1 — Tworzenie amorficznego Regionu E na limfocytach (jaskrawe CD45, niskie rozpraszanie
boczne).
3. Histogram 2 — Utworzyć prostoliniowy Region B na Histogramie 2, aby objąć wszystkie zdarzenia CD34
z niskim do pośredniego rozpraszaniem bocznym. Ustawić zatrzymanie liczenia na 75 000 zdarzeń (zdarzenia
CD45 ) na Histogramie 2.
+
4. Histogram 3 — Tworzenie amorficznego Regionu C na Histogramie 3, aby włączyć wszystkie zgrupowane
zdarzenia CD45
dim
5. Histogram 4 — Tworzenie amorficznego regionu D na Histogramie 4 w celu uwzględnienia wszystkich
grupowanych zdarzeń z pośrednim rozpraszaniem bocznym i pośrednim do wysokiego rozpraszaniem do
przodu.
6. Histogram 5 — Tworzenie regionu I Quadstat na Histogramie 5 w celu weryfikacji dolnej granicy ekspresji
CD45 na zdarzeniach CD34
7. Histogram 5 — Tworzenie amorficznego Regionu H na Histogramie 5, aby otaczał wszystkie komórki kontrolne
Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres, w tym dublety. Region H powinien znajdować się w prawym
górnym rogu Histogramu 5.
UWAGA:
8. Histogram 6 — Kopiowanie regionu D z Histogramu 4 jako Region F na Histogramie 6.
9. Histogram 7 — Tworzenie prostoliniowego Regionu G na Histogramie 7, aby zawierał tylko singlety fluorokulek
Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres. Region G można opisać jako „CAL", aby umożliwić automatyczne
obliczanie liczb bezwzględnych CD34
10.Histogram 8 — Tworzenie prostoliniowego Regionu J na Histogramie 8, aby oddzielić żywotne leukocyty
(ujemne zdarzenia 7- AAD) od zdarzeń nieżywotnych (głównie komórki kontrolne Stem-Trol Control Cells
dodatnie pod względem barwienia 7-AAD).
Tworzenie bramki
Utwórz bramki w następujący sposób:
1. Histogram 1 — Przypisać „H" do Histogramu 1, aby wyświetlić wszystkie zdarzenia wykluczając wszystkie
fluorokulki Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres. Tworzenie „not gates" (bez bramek), patrz podręcznik
analizatora.
2. Histogram 2 — Przypisać „A" do Histogramu 2, aby wyświetlić wszystkie zdarzenia CD45
3. Histogram 3 — Przypisać „A" i „B" (AB) do Histogramu 3, aby wyświetlić wszystkie zdarzenia CD45
B60231–AE
.
.
+
Upewnić się, że Region H jest rysowany jako region AMORPHOUS (AMORFICZNY).
HPC (dodatkowe szczegóły, patrz podręcznik analizatora).
+
HPC, proces mogący opóźniać etap analizy.
+
78 of 128
do zebrania i prawidłowej akumulacji
+
i wyeliminować płytki
+
.
+
+
CD34 .
+ +