Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 54

METODBESKRIVNING
För automatisk analys, se guiden för stemCXP-systemet som medföljer stemCXP-systemprogramvaran för
fullständiga anvisningar.
För manuell analys, se Stem-Kit Reagents bipacksedel och följande procedur.
OBS! Kör en processkontroll för standardisering av analysen när nya Stem-Kit Reagents
inkommer och dagligen efter det, genom färgning av Stem-Trol Control Cells med
ett normalt perifert helblodsprov från en frisk donator. Eftersom Stem-Trol Control
Cells är stabiliserade celler (d.v.s. icke-viabla celler) kan dessutom färgning med
7-AAD-viabilitetsfärg kontrolleras visuellt på Stem-Trol Control Cells (se avsnittet Skapa
histogram).
Kontrollera att flödescytometern är korrekt inställd och standardiserad för fluorescensintensitet enligt tillverkarens
och laboratoriets riktlinjer. Se till att inställningarna för fluorescenskompensation är korrekt justerade enligt
tillverkarens och laboratoriets riktlinjer.
Rumstemperera kontrollreagens och antikroppar.
För varje experiment ska du etikettera ett provrör: TROL 45/34/7-AAD.
1. Pipettera 20 µL CD45-FITC / CD34-PE till provröret.
2. Pipettera 20 µL 7-AAD-viabilitetsfärg till provröret.
VIKTIGT!
3. Pipettera noggrant 100 µL av ett väl blandat normalt helblodsprov till provrörets botten med en kalibrerad
positiv förskjutningspipett eller repeater-pipett.
4. Bered och tillsätt Stem-Trol:
• Vortexa Stem-Trol Control Cells i 5 sekunder.
• Pipettera noggrant 20 µL Stem-Trol Control Cells till provröret.
• Vortexa provrören i 5 sekunder.
5. Inkubera vid rumstemperatur (18–25 °C) i 20 minuter, i skydd mot ljus.
6. Tillsätt 2 mL beredd 1X NH
Detaljerad information om beredning av lyseringslösningen finns i Stem-Kit Reagents bipacksedel.
7. Inkubera vid rumstemperatur i 10 minuter, i skydd mot ljus.
8. Förvara provrören i ett rack placerat på is (2–8 °C) och skyddade från ljus.
VIKTIGT!
9. Blanda försiktigt Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres genom att invertera flaskan 3 till 5 gånger före
användning. Undvik överdriven blandning för att minimera luftbubbelbildning.
10.Före insamlingen ska du pipettera 100 µL Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres till provröret.
11. Vortexa i 5 sekunder omedelbart efter varje tillsats. Förvara vid 2–8 °C. Upprepa vortexningen omedelbart
innan den flödescytometriska insamlingen utförs.
VIKTIGT!
B60231–AE
Det finns risk för ofullständig lysering om blodprov finns kvar på provrörets överdel eller
sida. Var försiktig vid pipettering för att förhindra att blodet rör vid provrörets överdel
eller sida. Rengör vid behov provröret med en bomullstopp för att ta bort alla spår av
blodprov från överdelen eller sidan av provröret.
Cl Lysing Solution till provröret och vortexa omedelbart i 5 sekunder.
4
Om luftbubblor pipetteras kan det leda till felaktiga resultat. Överdriven blandning av
Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres kan leda till att det bildas luftbubblor.
Blanda inte Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres för mycket, och pipettera inte
luftbubblor till provrören.
Det finns risk för felaktiga resultat om provet analyseras mer än 1 timme efter tillsättning
av Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres. Beredda prover måste analyseras inom
1 timme efter tillsättning av Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres.
54 of 128