Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 64

ΣΗΜΕΙΩΣΗ:
8. Ιστόγραμμα 6 – Αντιγράψτε την περιοχή D από το Ιστόγραμμα 4 ως περιοχή F στο Ιστόγραμμα 6.
9. Ιστόγραμμα 7 – Δημιουργήστε μια άμορφη περιοχή G στο Ιστόγραμμα 7 για να συμπεριλάβετε μόνο τα μονά
Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres. Μπορείτε να επισημάνετε την περιοχή G με την ετικέτα «CAL»
για να είναι δυνατός ο αυτόματος υπολογισμός των απόλυτων αριθμών των CD34
πληροφορίες, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο του οργάνου).
10.Ιστόγραμμα 8 – Δημιουργήστε μια ορθογώνια περιοχή J στο Ιστόγραμμα 8 για τον διαχωρισμό των βιώσιμων
λευκοκυττάρων (αρνητικά 7-AAD συμβάντα) από τα μη βιώσιμα συμβάντα (κυρίως Stem-Trol Control Cells
θετικό για χρώση 7-AAD).
Δημιουργία Ρύθμισης διόδου
Δημιουργήστε τις οριοθετήσεις ως ακολούθως:
1. Ιστόγραμμα 1 – Αντιστοιχίστε το «H» στο Ιστόγραμμα 1 για προβολή όλων των συμβάντων, με εξαίρεση όλα
τα Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres. Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο του οργάνου για τη δημιουργία «not
gates» .
2. Ιστόγραμμα 2 – Αντιστοιχίστε το «A» στο Ιστόγραμμα 2 για προβολή όλων των συμβάντων CD45
3. Ιστόγραμμα 3 – Αντιστοιχίστε τα «A» και «B» (AB) στο Ιστόγραμμα 3 για προβολή όλων των συμβάντων
CD45 CD34 .
+ +
4. Ιστόγραμμα 4 – Αντιστοιχίστε τα «A» και «B» και «C» (ABC) στο Ιστόγραμμα 4 για προβολή όλων των
ομαδοποιημένων συμβάντων CD45
CD45 έπειτα από χρώση. Τα συμβάντα από την περιοχή ABCD είναι πραγματικά CD34
5. Ιστόγραμμα 5 – Χωρίς οριοθέτηση για εμφάνιση όλων των συμβάντων.
6. Ιστόγραμμα 6 – Αντιστοιχίστε το «E» για προβολή των λεμφοκυττάρων με τη μορφή οπτικού ελέγχου στον
διαχωριστή.
7. Ιστόγραμμα 7 – Αντιστοιχίστε το «H» στο Ιστόγραμμα 7 για προβολή όλων των Stem-Count ή Flow-Count
Fluorospheres, συμπεριλαμβανομένων των διπλών.
8. Ιστόγραμμα 8 – Αντιστοιχίστε το «A» στο Ιστόγραμμα 8 για προβολή των συμβάντων CD45
Ρύθμιση κυτταρόμετρου ροής
1. Εξασφαλίστε ότι το κυτταρόμετρο ροής είναι σωστά ευθυγραμμισμένο και τυποποιημένο για τη σκέδαση φωτός
και την ένταση φθορισμού σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες του κατασκευαστή και του εργαστηρίου.
Επαληθεύστε ότι η αντιστάθμιση χρώματος έχει ρυθμιστεί κατάλληλα για τυπική λειτουργία. Για περαιτέρω
οδηγίες, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο του οργάνου.
2. Περιδινήστε τα δοκιμαστικά σωληνάρια για 5 δευτερόλεπτα.
3. Πραγματοποιήστε λήψη δεδομένων στο κυτταρόμετρο ροής.
75.000 συμβάντων CD45
4. Προσαρμόστε τον διαχωριστή και τις περιοχές αναλύοντας το σωληνάριο TROL 45/34/7-AAD.
Παράδειγμα Ανάλυσης
Τα ιστογράμματα που περιλαμβάνονται στο ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ παρουσιάζονται με αύξουσα σειρά, όπως
παρουσιάζονται στο πρωτόκολλο.
Υπολογισμός των CD34
Χρήση αποτελεσμάτων κυτταρομετρίας ροής που έχουν προσαρμοστεί αυτόματα με την προσδιορισμένη
συγκέντρωση των Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres, η οποία ελήφθη με χρήση του λογισμικού System II
(Έκδοση 3.0) και ενός κυτταρόμετρου ροής COULTER EPICS XL/XLMCL.
Για τη λήψη των προσδιορισμών των απόλυτων αριθμών μέσω αυτόματου υπολογισμού με τη χρήση
κυτταρόμετρων ροής COULTER EPICS XL / XL-MCL, θα πρέπει να έχει εισαχθεί η σωστή προσδιορισμένη
συγκέντρωση των Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres πριν από τη λήψη του δείγματος.
Εισαγάγετε την ονομασία «CAL» ως ονομασία της περιοχής G των μονών Stem-Count ή Flow-Count
Fluorospheres, και έπειτα εισαγάγετε την τιμή, για παράδειγμα 1.000, στο πλαίσιο CAL FACTOR (Συντελεστής
βαθμονόμησης) που εμφανίζεται στο πλαίσιο διαλόγου STATISTICS (Στατιστικά στοιχεία) του μενού SET-UP
SCREEN PROTOCOL (Πρωτόκολλο οθόνης ρυθμίσεων).
Εισαγωγή του συντελεστή CAL για Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres:
B60231–AE
Διασφαλίστε ότι η περιοχή H έχει σχεδιαστεί ως AMORPHOUS (Άμορφη) περιοχή.
CD34
+
.
+
Stem-Trol Control Cells
+
με χαμηλή έως μέτρια πλάγια σκέδαση και χαμηλή έκφραση
+
64 of 128
HPC (για περισσότερες
+
HPC.
+
.
+
Απαιτείται η ανάλυση τουλάχιστον
.
+