Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 13

Les Histogrammes 5 à 7 sont destinés à surveiller les paramètres importants pendant l'étape d'acquisition. Ces
derniers comprennent le discriminateur du Forward Scatter (diffusion avant), le nombre d'événements CD45
recueillir et l'accumulation correcte de singulets fluorosphères.
L'Histogramme 8 est destiné à discriminer et analyser les événements viables des événements non viables en cas
de besoin.
Création des Régions
Créer les régions de la manière suivante:
1. Histogramme 1 – Créer une région rectilinéaire A pour inclure tous les CD45
plaquettes, les débris des hématies et les agrégats.
2. Histogramme 1 – Créer une région amorphe E sur les lymphocytes (CD45 brillant, Side Scatter (diffusion
latérale) bas).
3. Histogramme 2 – Créer une région rectilinéaire B sur l'Histogramme 2 pour inclure tous les
événements CD34
75 000 événements(événements CD45
4. Histogramme 3 – Créer une région amorphe C sur l'Histogramme 3 pour inclure tous les événements CD45
regroupés.
5. Histogramme 4 – Créer une région amorphe D sur l'Histogramme 4 pour inclure tous les événements
regroupés avec un Side Scatter (diffusion latérale) intermédiaire et un Forward Scatter (diffusion avant)
intermédiaire à élevé.
6. Histogramme 5 – Créer une région quadstat I dans l'Histogramme 5 pour vérifier la limite inférieure de
l'expression de CD45 sur les événements CD34
7. Histogramme 5 – Créer une région amorphe H sur l'Histogramme 5 pour encercler tous les Stem-Count ou
Flow-Count Fluorospheres, y compris les doublets. La région H doit se situer dans le coin supérieur droit de
l'Histogramme 5.
REMARQUE:
8. Histogramme 6 – Copier la région D de l'Histogramme 4 en tant que région F de l'Histogramme 6.
9. Histogramme 7 – Créer une région rectilinéaire G sur l'Histogramme 7 pour englober uniquement les singulets
Stem-Count ou Flow-Count Fluorospheres. La région G peut être étiquetée « CAL » pour permettre le calcul
automatique des nombres absolus de CD34
10.Histogramme 8 – Créer une région rectilinéaire J sur l'Histogramme 8 pour séparer les leucocytes viables
(événements négatifs 7- AAD) des événements non viables (principalement les Stem-Trol Control Cells
positives à la coloration 7-AAD).
Création des Fenêtres d'Analyse
Créer les contrôles de la manière suivante :
1. Histogramme 1 – Attribuer « H » à l'Histogramme 1 pour afficher tous les événements excluant tous les
Stem-Count ou Flow-Count Fluorospheres. Se référer au manuel de l'instrument pour la création « not gates »
(sans limites). "
2. Histogramme 2 – Attribuer « A » à l'Histogramme 2 pour afficher tous les événements CD45
3. Histogramme 3 – Attribuer « A » et « B » (AB) à l'Histogramme 3 pour afficher tous les événements CD45
CD34 .
+
4. Histogramme 4 – Attribuer « A » et « B » et « C » (ABC) à l'Histogramme 4 pour afficher tous les événements
CD45 CD34 et les événements regroupés avec un Side Scatter (diffusion latérale) faible à intermédiaire et
+ +
une expression de coloration CD45 faible. Les événements de la région ABCD sont réellement CD34
5. Histogramme 5 – Non fenêtré pour visualiser tous les événements.
6. Histogramme 6 – Attribuer « E » pour afficher les lymphocytes en tant que contrôle visuel sur le discriminateur.
7. Histogramme 7 – Attribuer « H » à l'Histogramme 7 pour afficher tous les Stem-Count ou Flow-Count
Fluorospheres, y compris les doublets.
8. Histogramme 8 – Attribuer « A » à l'Histogramme 8 pour afficher tous les événements CD45
B60231–AE
avec un Side Scatter (diffusion latérale) faible à intermédiaire.
+
+
s'assurer que la région H est dessinée comme une région AMORPHOUS (AMORPHE).
) dans l'Histogramme 2.
.
+
HPC (se référer au manuel de l'instrument pour plus de détails).
+
13 of 128
leucocytes et éliminer les
+
Définir un arrêt à
.
+
+
.
+
à
+
faibles
+
HPC.