Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 108

3. Histograma 2 – Creați o regiune B rectiliniară pe Histograma 2 pentru a include toate evenimentele CD34
dispersie perpendiculară de la scăzută la intermediară. Setați un contor de oprire pentru 75.000 de evenimente
(evenimente CD45
4. Histograma 3 – Creați o regiune C amorfă în Histograma 3 pentru a include toate evenimentele CD45
5. Histograma 4 – Creați o Regiune D amorfă în Histograma 4 pentru a include toate evenimentele din cluster cu
dispersie perpendiculară intermediară și dispersie pe direcția înainte intermediară până la ridicată.
6. Histograma 5 – Creați o regiune Quadstat I în Histograma 5 pentru a verifica limita inferioară a expresiei CD45 la
evenimentele CD34
7. Histograma 5 – Creați o regiune amorfă H în histograma 5 pentru a înconjura toate valorile Stem-Count sau
Flow-Count Fluorospheres, inclusiv dublurile. Regiunea H ar trebui să se găsească în colțul dreapta sus al Histogramei
5.
OBSERVAŢIE:
8. Histograma 6 – Copiați regiunea D din Histograma 4 ca Regiune F în Histograma 6.
9. Histograma 7 – Creați o regiune G rectiliniară în Histograma 7 pentru a include numai valorile identice pentru
Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres. Regiunea G poate fi etichetată drept „CAL" pentru a permite calcularea
automată a numerelor absolute de CD34
10. Histograma 8 – Creați o regiune rectiliniară J în Histograma 8 pentru a separa leucocitele viabile (evenimente 7-AAD
negative) de evenimentele neviabile (în special celule pozitive Stem-Trol Control Cells pentru colorarea 7-AAD).
Crearea porții
Creați porțile astfel:
1. Histograma 1 – Atribuiți valoarea „H" histogramei 1 pentru a afișa toate evenimentele, mai puțin toate valorile
Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres, inclusiv dublurile. Consultați manualul instrumentului pentru a vedea
cum se creează regiunile „not gates ".
2. Histograma 2 – Atribuiți valoarea „A" Histogramei 2 pentru a afișa toate evenimentele CD45
3. Histograma 3 – Atribuiți valorile „A" și „B" (AB) Histogramei 3 pentru a afișa toate evenimentele CD45
4. Histograma 4 – Atribuiți valorile „A", „B" și „C" (ABC) Histogramei 4 pentru a afișa toate evenimentele CD45
din cluster cu dispersie perpendiculară de la scăzută la intermediară și colorare CD45 scăzută. Evenimentele din
Regiunea ABCD reprezintă CD34
5. Histograma 5 – Anulați porțile pentru a afișa toate evenimentele.
6. Histograma 6 – Atribuiți valoarea „E" pentru a afișa limfocitele ca verificare vizuală la discriminator.
7. Histograma 7 – Atribuiți valoarea „H" histogramei 7 pentru a afișa toate valorile Stem-Count sau Flow-Count
Fluorospheres, inclusiv dublurile.
8. Histograma 8 – Atribuiți valoarea „A" histogramei 8 pentru a afișa toate evenimentele CD45
Configurarea citometrului de flux
1. Asigurați-vă că sistemul de citometrie de flux este corect aliniat și standardizat pentru dispersia luminii și
intensitatea de fluorescență, conform instrucțiunilor producătorului și laboratorului. Verificați compensarea culorii:
aceasta trebuie să fie configurată pentru operare standard. Consultați manualul instrumentului pentru instrucțiuni
suplimentare.
2. Omogenizați eprubetele de test timp de 5 secunde.
3. Realizați achiziția datelor pe citometrul de flux. Trebuie analizate minimum 75.000 de evenimente CD45
4. Ajustați discriminatorul și regiunile analizând eprubeta TROL 45/34/7-AAD.
Exemplu de analiză
Histogramele prezentate în ANEXĂ sunt afișate în ordine crescătoare, așa cum sunt afișate în protocol.
Calcularea numărului de CD34
Utilizarea rezultatelor citometrului de flux ajustate automate cu concentrația de test pentru Stem-Count sau Flow-Count
Fluorospheres obținută utilizând software-ul System II (versiunea 3.0) și un citometru de flux COULTER EPICS XL/XLMCL.
Pentru a obține determinări de numere absolute calculate automat la citometrele de flux COULTER EPICS XL / XL-MCL,
trebuie să introduceți valoarea corectă pentru concentrația testată de Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres înainte
de solicitarea probelor.
B60231–AE
) în Histograma 2.
+
.
+
Asigurați-vă că Regiunea H este trasată ca regiune AMORPHOUS (Amorfă).
+
HPC reale.
+
Stem-Trol Control Cells
+
HPC (consultați manualul instrumentului pentru detalii suplimentare).
108 of 128
cu
+
din cluster.
dim
.
+
CD34 .
+ +
CD34
+ +
.
+
.
+